酶联免疫吸附检测法的应用研究进展

酶联免疫吸附检测法(ELISA)由于具有灵敏、特异、简单、快速及易于自动化操作等优点而得到了快速发展,并且被广泛应用于多个领域.本文对ELISA检测法应用现状及优缺点进行综述,为今后ELISA检测法的更为广阔的应用与发展提供参考.     

酶联免疫吸附法的新进展

ELISA (酶联免疫吸附法)试验近两年来的进展情况可分为5部分:a.抗原包被技术,b.提高 ELISA 的灵敏度,c.提高 ELISA 的特异性,d.ELISA 的实验设计与理论,e.ELISA 的应用.从中可以看出 ELISA 的进展趋势.     

酵母表面展示-酶联免疫吸附测定法的建立

以表面展示人源蛋白酶体α亚基6蛋白的重组酵母细胞,结合酶联吸附免疫原理检测技术,以表面展示有人源蛋白酶体α亚基6(proteasome subunit alpha6,PSα6)的重组酵母细胞及其对应的单克隆抗体3D7D12D为研究对象,建立酵母酶联免疫吸附(yeast-ELISA)检测技术,应用于检测小鼠单克隆抗体及单抗效价.应用该方法最佳酵母浓度为0.50A600;测得单抗效价为1∶5×105,与常规ELISA效价接近;交叉试验和阻断试验表明该方法特异性强;同时该方法可用于检测抗血清.结果表明,yeast-ELISA可直接应用于检测单抗,测得效价与常规抗原包被间接ELISA具有良好一致性,特异性好,无交叉反应性.     

酶联免疫吸附测定法

酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种灵敏度、特异性和精度都十分优良的测定方法。在诊断、疾病监控以及研究用途方面得到了广泛的运用。现在还在对其进行开发，以简化工序，提高灵敏度。此讲由SRL公司试药部的原田弘智对其进行讲解。[编者按]     

梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验的建立及应用

建立梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验（ELISA）,用于梅素血清学诊断和调查。其法,用表达的重组抗原IPN17和TmpA,建立检测血清特异抗体的间接ELISA,并与其它检测方法比较,分别检测梅毒参比血清、病人及献血员血清。其结果,敏感性、特异性均为100％。新建ELISA与TPHA的总符率为95．7％,明显高于RPR与TPHA的总符合率（89．1％）。献血员人群抗体阳性率为0．3％－0．69％,健康人群中抗体阳性率较低。     

酶联免疫吸附试验定量检测血清肝素酶方法的建立及应用

目的：建立一种简便、微创的血清肝素酶酶联免疫吸附（ELISA）定量检测方法,并对肿瘤患者和正常人血清肝素酶进行比较,初步探讨血清肝素酶水平与肿瘤发生、发展的关系。方法：选择鼠抗人肝素酶单克隆抗体和兔抗人肝素酶多克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法,并利用此方法检测健康献血者和肿瘤患者血清中的肝素酶水平。结果：组内数据稳定,可重复;肿瘤患者血清中肝素酶D450nm值高于健康献血者。结论：所建立的血清肝素酶ELISA检测方法灵敏、高效,可用于肿瘤的辅助诊断。     

酶联免疫吸附试验夹心法检测解脲脲原体方法的建立

目的为了提高解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)检测的快速性。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法检测UU抗原并与传统的培养法相比较。结果ELISA夹心法敏感度为92.6%,特异度为97.4%,最低能够检测出蛋白含量为5～10ng/ml的UU抗原。结论ELISA夹心法是一种敏感、方便、快捷、适合大规模标本检测解脲脲原体的方法。     

龙葵抗阿特拉津生物型叶绿体基因文库的建立

用对阿特拉津(Atrazine)除草剂抗性的龙葵生物型B_(12)株系作材料,制备叶绿体DNA。B_(12)株ctDNA(叶绿体DNA)经BamHI酶解,在0.7％琼脂糖凝胶电泳上呈现24条带,其中最大的片段为18.6kb,最小的片段为1kb。用pBR322作为载体,构建B_(12)株ctDNA BamHI片段文库。通过与探针的分子杂交,从中筛选出含有编码叶绿体32kd蛋白质的阿特拉津抗性基因的克隆pSB135和含有ATP合酶α亚单位基因的克隆pSB132。     

酶联免疫吸附(ELISA)诊断肺肿瘤方法的建立

目的:早期确诊并得到及时治疗是有效防止肺肿瘤恶化的有效途径,本文旨在探讨建立ELISA的鉴定标准,以便早期筛选肺肿瘤特异蛋白质,有助于对该病的早期诊断.方法:实验主要以酶联免疫吸附(ELISA)试验为基础,以期获得诊断肺肿瘤的ELISA方法.以CA-125作为抗原,按照常规ELISA方法进行实验,确定抗原包被浓度、一抗稀释度及一抗最佳作用时间,达到优化ELISA检测肺肿瘤条件.结果:初步建立了ELISA方法检测肺肿瘤的条件,同时确定了抗原的最佳包被浓度为5μg/mL,血清一抗的最佳稀释比为1∶800,最佳作用时间为1.5 h.结论:ELISA检测肺肿瘤方法的建立,为临床中早期检测肿瘤的发生提供了数据支持,为进一步研究与优化肺肿瘤的检测方法奠定基础.     

抗阿特拉津基因PCR检测方法的建立与应用

阿特拉津是一种均三氮苯类除草剂,其作用机理是取代质体醌与叶绿体类囊体膜上的32kDa蛋白的结合,从而阻断光系统Ⅱ的电子传递而使光合作用受阻。32kDa蛋白由叶绿体psbA基因编码,psbA基因的突变使32kDa蛋白的第264位丝氨酸变为苷氨酸或丙氨酸,从而丧失与阿特拉津结合的能力,导致对阿特拉津除草剂的抗性。由于阿特拉津除草剂在大豆产区的广泛使用,选择和培育阿特拉津抗性     

应用套式RT-PCR检测SARS患者血液样品中SARS冠状病毒

建立了套式RT-PCR方法检测SARS患血液样品中SARS冠状病毒的方法,并检测血液样品257份。同时将RT-PCR与ELISA检测IgG、IgM的方法进行了比较。结果RT-PCR方法的总检出率为72％,IgG总检出率为68％,IgM总检出率为43％。     

Sensing bacteria but treating them well: determination of optimal incubation and storage conditions

Bacteria detection in real samples often involves long and tedious methodologies such as culture enrichment, biochemical screening, and serological confirmation. In this context, the development of biosensors and quick assays for bacteria detection appears as fast growing fields. However, a detailed study of reports in these areas reveals the existence of important differences in bacteria storage, handling, and detection conditions, indicating that authors do not take advantage of the well-established procedures existing for classical techniques such as enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In the current work, we exploit standard ELISA methodology to identify and study diverse parameters that can be critical along the different steps of bacteria detection and sensing. Among others, we studied in detail the effect of the bacterial strain used and the presence of detergent and glycerol in assay performance, as well as the effects of heat inactivation or storing conditions, on bacteria integrity and thus detectability. Finally, we describe the use of “ready-to-use” frozen bacterial pellets as an excellent alternative to the use of daily prepared fresh cultures during assay optimization and preparation of calibration standards. The results presented are also supported by an extensive bibliography search, giving shape to an important compilation of information that will be useful to authors working in a variety of methodologies and sensing formats.     

An enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of cytoplasmic polyhedrosis virus

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of Euxoa scandens cytoplasmic polyhedrosis virus (EsCPV) is described. Antisera to EsCPV, produced in rabbits and guinea pigs, are specific to EsCPVs when used in an indirect assay. This indirect assay approach permits the detection of homologous antigens at a concentration of about 1 μg/ml; however, this procedure is not suitable to test large numbers of unpurified specimens. For this type of analysis we used a double antibody sandwich assay which can detect 10 ng/ml of homologous antigen in unpurified material without nonspecific reactions. This assay is used to diagnose EsCPV infections in field and laboratory studies.     

重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)鉴别试验的方法研究

目的：建立重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)鉴别试验的方法。方法：取重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)以1：10比例加入lmol/L盐酸调节pH值,采用ELISA双抗体夹心法检测,同时设以氢氧化铝、未处理的重组乙型肝炎疫苗、狂犬疫苗、出血热疫苗,以及试剂盒的阴、阳性作为对照。结果：狂犬疫苗、出血热疫苗及氢氧化铝对照为阴性,直接检测重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)呈弱阳性,加入盐酸调节pH值后原倍样品呈弱阳性,10倍稀释后呈强阳性。采用该方法检测5批疫苗均呈强阳性。组内平行试验,组间重复试验。结论：将重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)调节pH值后10倍稀释,用ELISA双抗体夹心法检测呈阳性,而且稳定可靠,该方法可用于该疫苗的鉴别试验。     

定量检测组织型纤溶酶原激活剂夹心ELISA方法的建立

目的:建立灵敏、特异的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)定量测定方法,为血栓性疾病和肿瘤性疾病的早期诊断及疗效评估提供辅助手段。方法:采用抗t-PA多克隆抗体包被酶联板、HRP标记抗t-PA单克隆抗体为标记抗体、重组t-PA为标准品,建立定量测定t-PA的夹心ELISA双抗体法。以t-PA测定的特异性、灵敏性和重复性评价夹心ELISA测定法。结果:夹心ELISA测定法可检测t-PA浓度为0.5ng/mL的样品,不同样品的组内和组间的变异系数分别为4.7%和8.4%。采用夹心ELISA法测定40份正常人血浆,t-PA的平均含量为(4±2.1)ng/mL。结论:夹心ELISA测定法具有灵敏性高、特异性强的特点,可用于人血浆中t-PA水平的定量测定。