铜绿假单胞菌多重耐药基因的筛选及鉴定

[目的]研究铜绿假单胞菌中与耐药性相关的基因.[方法]筛选转座突变体文库中对多种抗菌药物敏感的突变体,通过随机PCR、核苷酸测序及序列比对确定突变体中转座子的插入位点及其破坏的基因.[结果]筛选得到2株对多种抗菌药物敏感的突变体,其中被破坏的基因分别为功能未知的新基因PA2580和PA2800.[结论]PA2580和PA2800可能分别通过参与细胞氧化还原作用和细胞壁合成进而与铜绿假单胞菌耐药性相关.     

铜绿假单胞菌耐药性相关基因的筛选及鉴定

铜绿假单胞菌在人体内能引起严重的感染. 由于铜绿假单胞菌高水平的内在性和获得性耐药性, 使其引起的感染难以治愈. 为解决该问题, 弄清病原菌抗生素抗性的分子机制是一个关键. 本实验构建了含有17000个铜绿假单胞菌转座突变株文库, 并在LB固体平板上, 用7种抗生素在最小抑制浓度(MIC)和1/2MIC条件下, 筛选抗生素抗性发生变化的突变株. 结果确定了43株转座突变株, 每个突变株对至少一种抗生素的敏感性表现出增加3倍或降低1/2的表型. 通过随机PCR和DNA测序, 确定了这些铜绿假单胞菌突变体中转座子在基因组上的插入位点, 确定了被破坏的基因. 其中, 9个是已知的与抗生素抗性相关基因, 包括mexI, mexB和mexR; 24个是以前未知与抗性相关的基因, 包括一个菌毛合成基因pilY1, 这个菌毛合成基因的破坏导致菌株对羧苄青霉素的MIC增加了128倍. 此外, 43个基因中有12个是功能完全未知的基因. 这些基因的筛选鉴定有助于了解铜绿假单胞菌中抗生素抗性的产生机制, 这些基因或许可成为控制或扭转抗生素抗性的作用靶点.     

铜绿假单胞菌HZ15的生物活性

【背景】 实验室前期自巨网苔蛾幼虫分离所得的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) HZ15对烟草黑胫病具有较强拮抗作用,但其余生物活性尚未挖掘。【目的】 通过对菌株HZ15在农业上的生物活性进行探究,旨在为该菌株在农业领域的应用提供理论基础,并为其生物农药开发提供科学依据。【方法】 采用琼脂扩散法、平板对峙、饲喂法、生物测定法、盆栽和大田试验等探究菌株HZ15的抑菌、促生、杀虫及对黑麦草的除草活性。【结果】 菌株HZ15对4种植物病原细菌具有较强的抑菌活性,对11种植物病原真菌的抑制率均达到60%以上,表现出广谱抑菌活性;对烟草青枯病的盆栽试验防效达52.48%,与52%氯尿硫酸铜可溶性粉剂800倍液处理间无显著差异。大田促生试验中,菌株HZ15能够显著增加烟草的叶片数和最大叶面积。此外,该菌及其次生代谢产物对红火蚁和秀丽隐杆线虫均有较强的毒杀作用,其中,上清滤液对红火蚁的毒杀作用最强,而菌液对秀丽隐杆线虫的毒杀能力最好。对黑麦草的除草活性实验表明,菌株HZ15对黑麦草的萌发抑制率达63.80%,并且显著降低了黑麦草的根长、茎长及鲜重。【结论】 铜绿假单胞菌HZ15具有抑菌、促生、杀虫、抑制黑麦草生长的生物活性,在农业和环境管理中具有重要的应用潜力。     

铜绿假单胞菌LexA蛋白的纯化及免疫活性分析

目的：对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的LexA蛋白进行表达、纯化,并检测其免疫活性。方法： lexA基因片段插入表达载体pET32a(+),在E.coli BL21(DE3)中表达。包涵体经洗涤并用8M尿素溶解,镍离子亲合柱层析为第一步纯化,Superdex 75凝胶过滤层析作为第二步精细纯化,HPLC测定蛋白的浓度,将纯化的LexA蛋白经注射途径免疫家兔,制备兔抗LexA血清,采用免疫双扩、ELISA及Western Blot分析LexA的免疫活性。结果：LexA以包涵体形式表达,经镍离子亲合柱层析和凝胶过滤层析二步组合纯化目的蛋白,经HPLC测定目的蛋白的最终纯度为98.97%,表达及纯化的LexA具有良好的免疫活性。     

309株铜绿假单胞菌的分布及耐药性

目的 分析铜绿假单胞菌的耐药特点,为临床合理选药提供依据。方法　对首都医科大学附属北京潞河医院2014年１月至12月分离的铜绿假单胞菌,采用全自动细菌鉴定仪,用微量稀释法进行药敏试验,并用WHONET 5.6软件对药敏结果进行统计分析。结果　309株铜绿假单胞菌对哌拉西林、哌拉西林他唑巴坦、阿米卡星、妥布霉素的敏感性菌大于90.0%,对头孢吡肟、庆大霉素的敏感性分别为84.8%、84.5%,对亚胺培南、美罗培南的敏感率为71.5%、74.1%,对氨曲南的耐药率达78.0%;标本来源主要来自呼吸道标本,其次为分泌物标本、尿液标本;科室主要以呼吸科、神经外科、ICU为主。结论 对铜绿假单胞菌感染应优先选择哌拉西林、哌拉西林他唑巴坦、阿米卡星、妥布霉素等,临床应限制氨曲南的使用。     

连续七年铜绿假单胞菌的临床分布及耐药性变化分析

了解铜绿假单胞菌在医院的动态分布及耐药情况变化,防止耐药菌株的传播及暴发流行。细菌鉴定采用法国生物梅里埃公司的API 20NE和VITEK2系统,药敏试验采用K-B纸片扩散法,结果判定按照2005版CLSI的标准,药敏结果分析采用WHONET5.3。7 a共分离铜绿假单胞菌2 220株,主要来源于病房的呼吸道标本,分离的细菌数逐年增加,连续7 a监测了14种抗菌药物,均有不同程度的耐药,且耐药率有逐年增加的趋势,尤其是从2003年起ICU病房成立后,ICU病房分离的PA数占总数的30%以上,引起总体耐药率的明显增加。动态监测铜绿假单胞菌的耐药情况,对临床治疗其引起的感染具有十分重要的意义。     

铜绿假单胞菌医院感染分布及耐药性分析

目的探讨铜绿假单胞菌临床分离株的感染分布情况及其抗生素的耐药情况,指导临床合理用药。方法对我院2006年1月至2008年6月住院患者分离的铜绿假单胞菌进行抗生素敏感性测定,采用API系统及VITEK2系统进行细菌鉴定,用K-B法进行药敏试验及结果观察。结果216例院内感染铜绿假单胞菌病例中,从痰标本中分离的菌株最多,阳性率为45．4％;铜绿假单胞菌对头孢噻肟、复方新诺明、头孢哌酮的耐药率较高,分别为88％、86．1％和85．2％,对美洛培南的敏感性最高达到94％。结论铜绿假单胞菌是医院病原菌感染的主要致病菌之一,加强细菌和药敏监测,选择敏感性强的药物,避免广谱抗菌药物的长期应用,是延缓耐药菌株增加的有效办法。     

铜绿假单胞菌医院感染调查及耐药分析

目的探讨铜绿假单胞菌(PA)医院感染的临床分布及耐药性,为临床合理使用抗菌药物及控制医院感染提供依据。方法 PA的培养与鉴定严格按照《全国临床检验操作规程》进行。药敏试验采用纸片扩散法(K-B法)。结果收集的359株PA中,分离率居前3位的临床科室依次为ICU、呼吸内科和神经内科,分别占38.1%、17.5%和13.9%;临床标本中以呼吸道标本分离率最高,占62.7%;PA对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低(9.7%),其次为阿米卡星(13.1%)和头孢他啶(17.8%),另12种抗菌药物的耐药率均较高。结论 PA耐药性已十分严重,临床应根据药敏结果合理使用抗菌药物并加强对细菌耐药性的全面监测。     

铜绿假单胞菌抗菌物质对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌活性研究

目的观察铜绿假单胞菌抗菌物质对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcusaureus,MRSA)的体外抑菌活性。方法用交叉划线接种方法进行铜绿假单胞菌对32株耐甲氧西林金葡菌的体外抗菌活性的测定。结果铜绿假单胞菌抗菌物质对MRSA的体外抑菌活性良好,产生色素的菌株的抗菌活性最好,15株铜绿假单胞菌中,7株产蓝绿色色素的铜绿假单胞菌,对MRSA的抑制率均达到了100%,平均抑菌带的宽度为37.7 mm。结论铜绿假单胞菌抗菌物质对32株MRSA具有较强的抗菌活性,无疑对MRSA感染的抗菌药物研制方面开辟了一条新的途径。这是国内的首次研究报道。     

铜绿假单胞菌的分布特点耐药性分析

目的分析3年来我院患者铜绿假单胞菌的耐药特点,为临床合理用药提供依据,并有助于医院感染预防与控制。方法对2010年至2012年我院各类感染患者标本中分离获得的铜绿假单胞菌,采用纸片扩散法（K-B法）检测抗菌药物的敏感性,并用WHONET5．3软件对药敏结果进行统计分析。结果3年分离的铜绿假单胞菌共计369株,其对多黏菌素B无耐药,对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮／舒巴坦、哌拉西彬他唑巴坦和阿米卡星的耐药率较低（6．81％～22．73％）,对其他抗菌药物的耐药率较高（32．47％～73．38％）。结论铜绿假单胞菌对多种抗菌药物均具有较高的耐药性,临床上治疗该菌感染时应根据药敏检测结果选择抗菌药物。     

三峡水库铜绿假单胞菌分离株的耐药性与毒理评价

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种重要的水源性和食源性致病菌,当机体免疫力下降时,易造成感染,了解铜绿假单胞菌的耐药性和致病力,对预防铜绿假单胞菌感染及其防治有重要意义。为探究三峡水库铜绿假单胞菌分离株的耐药性及其对秀丽线虫（Caenorhabditis elegans）的致病性,从三峡水库采集水样进行细菌分离,经形态学鉴定、生理生化鉴定、16S rDNA测序和oprI特异性基因鉴定筛选出铜绿假单胞菌,研究分离菌的耐药性、耐药基因和毒力基因,并利用模式生物秀丽线虫进行毒理评价。结果显示,从三峡水库分离鉴定出14株铜绿假单胞菌。分离株对青霉素G、氨苄青霉素、头孢唑林、卡那霉素、红霉素耐药,对阿米卡星、庆大霉素、诺氟沙星、环丙沙星、美罗培南、左氧氟沙星敏感。耐药基因bla TEM、aac(6′)-Ⅱ、qacEΔ1-sull、qnrS、mexR在所有分离菌株中呈阳性;耐药基因aac(3)-Ⅰ、tetA、tetB、tetD、tetE、cat、cmlA、qnrA、qnrD在所有分离菌株中呈阴性;此外,分离菌株携带多种毒力基因。分离菌PA7、PA8、PA12使秀丽线虫的平均寿命分别下降15%、14%、16%（P<0.05）,身体弯曲频率分别下降18%、33%、23%（P<0.05）,头部摆动频率分别下降10%、13%、11%（P<0.05）,最长寿命缩短约3 d。三峡水库中铜绿假单胞菌分离株具有多重耐药性,部分菌株对秀丽线虫有致病性,可为水体铜绿假单胞菌的感染防治提供一定参考。     

617株耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药性及其产超广谱β-内酰胺酶基因型研究

探讨耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及其产超广谱β-内酰胺酶基因型。收集2011年7月至2013年12月上海市中医药大学附属曙光医院临床分离的铜绿假单胞菌共1 125株,筛选亚胺培南耐药株,常规纸片法检测其耐药性,并用E-test检测金属β-内酰胺酶（MBL）,采用PCR法检测耐药基因型。结果显示,1 125株铜绿假单胞菌中耐亚胺培南铜绿假单胞菌共计617株,占54.8%;亚胺培南敏感铜绿假单胞菌共计508株,占45.2%。617株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌100%为多重耐药,而亚胺培南敏感铜绿假单胞菌的多重耐药率仅为13.78%,明显较前者低（χ²=871.15,P<0.05）;亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中MBL表型阳性共126株,阳性率为15.4%,94株(74.60%)表现为VIM-2阳性,10株（7.94%）表现为IMP-1阳性,1株检出OXA-10,〖WTBZ〗且该例菌株同时表达VIM-2。临床分离的耐亚胺培南的铜绿假单胞菌多为多重耐药,其产MBL的主要基因型是VIM-2。     

基于CiteSpace分析铜绿假单胞菌耐药性研究热点与趋势

【背景】铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是临床引发感染的主要病原菌之一,对多种抗菌药物均有耐药性,临床治疗难度大,对该病原菌耐药性的研究一直备受关注。【目的】基于CiteSpace可视化功能,探究铜绿假单胞菌耐药性研究现状、热点与发展趋势。【方法】利用文献计量分析法,以2014–2021年中国知网(CNKI)、万方数据库(Wanfang)、Web of Science (WoS)共8 996篇铜绿假单胞菌耐药性的中英文文献为分析样本,运用Citespace软件对文献发文量、作者合作网络、国家和机构合作网络、文献共被引及期刊分析、关键词聚类、突现等方面进行分析,以探究该研究主题的研究热点及趋势。【结果】英文文献发文量增长速度高于中文文献;我国文献发文量仅次于美国、印度,在该领域科研成果贡献度较高,国际学术影响力较大;中英文文献中均对院内感染疾病和耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌持高关注度。然而,中文文献较关注铜绿假单胞菌耐药性的临床防治问题,英文文献则较关注铜绿假单胞菌耐药性的基础研究。【结论】国内外铜绿假单胞菌耐药性研究对院内感染疾病及新型耐药菌的产生与防治关注度最高,暗示以上研究主题是该领域的研究热点与趋势。     

辽宁省近5年痰培养主要病原菌分布及临床意义

了解住院患者痰培养的病原菌分布及其对常用抗菌药物的耐药情况,为临床合理用药提供参考.回顾性分析辽宁省2015年1月至2019年12月共3878份痰标本感染菌鉴定结果和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的药敏试验结果.采用法国梅里埃VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪进行菌种鉴定,并...     

Studies on the characterization of rat prostate androgen receptors

Summary Choline used as the sole carbon or carbon and nitrogen source induces in Pseudomonas aeruginosa an active transport system. The induction of the choline uptake is repressed by succinate independently of the presence of ammonium ion in the culture medium. The repression mediated by succinate was insensitive to cyclic AMP. Substitution for dibutyryl-cyclic AMP was without effect. Choline metabolites that also support the growth of Pseudomonas aeruginosa were poor inducer agents of the choline transport. Kinetic evidence and the employment of choline metabolites as effectors indicated that the choline uptake system of this bacterium is formed by at least two components: one of high affinity (Km=3 µM) and another of low affinity (Km=400 µM). Contrary to what occurs in the synaptosome system, the high affinity form for the choline uptake was not dependent on Na⁺ ions and is not inhibited by hemicholinium-3. Since Pseudomonas aeruginosa can utilize choline as the sole carbon and nitrogen source, the induction of the choline transport with two components in this bacterium may be related to its own strategy to survive and grow in an adverse environment.     

一株可高效降解羽毛的铜绿假单胞菌的分离、鉴定、产酶条件优化及其酶活研究

【目的】筛选海洋环境产角蛋白酶菌株,研究其发酵条件及酶学性质,为后续开发和利用海洋微生物降解废弃羽毛提供菌种资源和理论依据。【方法】采集广西北部湾某海鸭养殖场淤泥,用酪蛋白平板初筛和角蛋白酶活复筛获得羽毛降解效果好的菌株,并进行形态学和分子生物学鉴定;利用单因素和正交试验对菌株产酶条件进行优化,最后对酶学性质及羽毛降解产物的游离氨基酸组成进行研究。【结果】筛选到1株可高效降解羽毛的菌株,经鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa Gxun-7)。最佳产酶条件为：羽毛25 g/L,Zn2+0.10 g/L、初始pH 8.0、发酵温度32.5°C、发酵时间48 h,酶活力达124.03 U/mL,较优化前提高了2.3倍;酶学性质分析表明,该角蛋白酶最适作用温度和pH分别为70°C和8.0,化学试剂巯基乙醇可使酶活提高6.16倍,而苯甲基磺酰氟(PMSF)使相对酶活降至15.00%,该酶耐盐性较好(20%NaCl中相对酶活为74.29%);羽毛降解产物中检测到16种氨基酸,7种为必需氨基酸,总的游离氨基酸含量高达2 329.80 mg/L,其中缬氨酸含量最高为575....     

Induction and selection of formaldehyde-based resistance inPseudomonas aeruginosa

Summary A formaldehyde resistant (R) phenotype ofPseudomonas aeruginosa was isolated from a formaldehydesensitive (S) parent by sequential treatment with 1,3,5-tris-(ethyl)hexahydro-s-triazine (ET). The resistance of the (R) strain to treatment with ET was approximately 3-fold higher than the parental (S) strain. Two modes of resistance to ET, and simultaneous resistance to formaldehyde, are demonstrated: (1) transient or induced resistance is expressed during shor-term exposure to ET, and this resistance is gradually lost during subsequent growth in the absence of ET, and (2) resistance that results from a stable phenotypic change in the (S) strain following sequential treatment with ET ((R) strain phenotype). The observed activities of three forms of the formaldehyde oxidizing enzyme, formaldehyde dehydrogenase, are strongly correlated with the relative response of the (S) and (R) strains to treatment with ET. The observed resistance of the (R) strain appears to be due to high levels of an NAD⁺-linked, glutathione-dependent form of formaldehyde dehydrogenase as well as a dye-linked formaldehyde dehydrogenase. The transient or induced response of the (R) strain involves an increase in activity of the dye-linked formaldehyde dehydrogenase. The induced response of the (S) strain and an ATCC strain ofP. aeruginosa, however, is correlated with the two forms of the NAD⁺-linked enzyme (glutathione-dependent (EC 1.2.1.1) and independent (EC 1.2.1.46)) with no contribution from the dye-linked enzyme.     

铜绿假单胞菌异质性耐药的研究进展

异质性耐药是指细菌中的同源亚群对某种抗生素表现出不同的敏感性,被认为是细菌由敏感进化成完全耐药的中间阶段.常规的临床检验无法有效检测出异质性耐药,这对临床治疗用药造成了巨大的威胁,引起患者的反复感染和用药失败.铜绿假单胞菌作为医院内感染的主要条件致病菌之一,其耐药机制已被广泛研究,而异质性耐药研究则相对较少.本文主要就...     

Regulation of urea uptake inPseudomonas aeruginosa

The energy-dependent urea permease was studied in two strains ofPseudomonas aeruginosa, measuring the uptake (transport and metabolism) of¹⁴C-urea. In both strains urea uptakein vivo and urease activityin vitro differed significantly with respect to kinetic parameters, temperature and pH dependence and response to metabolic inhibitors. Ammonium strongly interfered both with the expression of the urea uptake system and its activity. The inhibition of the uptake activity by ammonium was partially relieved by hydraziniumsulfate, which prevented the translocation of ammonium into the cell, and in a methylammonium/ammonium transport-defective mutant of strain DSM 50071. Furthermore, methionine-sulfoximine, which prevented the intracellular glutamine formation from ammoniumvia inhibition of glutamine synthetase, relieved the inhibition of urea uptake by ammonium. These findings suggested that urea uptake activity inP. aeruginosa is regulated by intracellular glutamine.Abbreviations CCCP carbonylcyanide-m-chlorphenylhydrazone - DCCD dicyclohexylcarbodiimide - GS glutamine synthetase - MSX methionine-sulfoximine