单克隆抗体技术在纤溶酶分离纯化中的应用

目的探讨单克隆抗体技术在蛇毒纤溶酶分离纯化中的应用.方法用单抗技术制备亲和层析柱,来分离纯化纤溶酶.结果分离出的纤溶酶纯度高,无神经毒出血毒等毒性.结论运用单抗技术的亲和层析柱能有效分离纤溶酶.     

江浙蝮蛇蛇毒纤溶酶的纯化

目的：从江浙蝮蛇蛇毒中纯化出无出血毒的纤溶酶。方法：经DEAE-SepharoseFF离子交换树脂和Superdex75PG凝胶过滤树脂,从江浙蝮蛇蛇毒中纯化出2种可直接溶解纤维蛋白的蛋白酶：F1,F2。结果：它们20μg皮下注射小鼠都无出血反应,F1,F2SDS-PAGE电泳纯度在95%以上。结论：纯化的两个纤溶酶为进一步基础研究和临床应用奠定了基础。     

蛇毒纤溶酶的神经生长因子活性

目的证明蛇毒生长因子具有神经生长因子活性,并初步探讨其原因.方法分实验组和对照组,定量和定性测定两组的神经生长因子活性,对比蛇毒纤溶酶和神经生长因子的氨基酸序列.结果蛇毒纤溶酶在20U/ml时具有明显的神经生长因子活性,N-末端氨基酸序列与神经生长因子同源性达80～90%.结论蛇毒纤溶酶具有明显的神经生长因子活性,其结构与神经生长因子相似.     

蛇毒纤溶酶Alfimeprase在大肠杆菌中的可溶表达和纯化

Alfimeprase是Fibrolase的突变体,是一种蛇毒纤溶酶,有纤溶活性而无出血性。根据Alfimeprase的氨基酸序列和大肠杆菌密码子偏爱性,利用PCR的方法合成Alfimeprase DNA序列,分别融合在NusA和MBP的C端,与分子伴侣FkpA在大肠杆菌Origami B(DE3)中共表达,融合蛋白NusA/Alfimeprase以部分可溶的形式存在,可溶部分占上清总蛋白的25%左右,通过镍柱亲合层析纯化和肠激酶切割得到具有纤溶活性的重组蛋白Alfimeprase。本研究是首次报道在大肠杆菌中可溶表达Alfimeprase,为以后深入研究其功能及应用奠定了基础。     

蝮蛇蛇毒纤溶酶对动物血栓形成的研究

目的探讨蝮蛇蛇毒纤溶酶对实验性动物血栓形成的影响.方法采用Chandler氏体外法形成大白鼠体外血栓和家兔半体内血栓,给药组和对照组分别注射蛇毒纤溶酶及相同体积的生理盐水,分别测定两组动物体外形成的血栓重量和长度.结果给药组动物形成的血栓明显小于对照组.结论蝮蛇蛇毒纤溶酶具有抑制血栓形成的作用.     

蛇毒纤溶酶的性质及应用研究

蛇毒中含有许多不同生物活性的酶类,包括金属蛋白酶、凝血酶、丝氨酸蛋白酶、磷脂酶、磷酸二酯酶、透明质酸酶、精氨酸酯酶等。其中,在蝰亚科、蝮亚科和眼镜蛇科等蛇毒中存在着一类能直接溶解纤维蛋白（原）的酶,称为纤维蛋白（原）溶酶（简称纤溶酶,Fibrinolytic enzyme,FLE）。纤维蛋白原是由Aα、Bβ、γ三对肽链组成。纤维蛋白则是A、B两对肽链从Aα、Bβ两对肽链上水解下来后,剩下的（αβγ）2通过氢键聚合形成的不溶性纤维蛋白多聚体。纤溶酶对两者都有水解作用。自1976年Ouyang和Huang首次从尖吻蝮蛇毒中获得纯化的纤溶酶以来,迄今已从不同科属的至少15种蛇毒中获得了25种以上的纯化纤溶酶,并对其分子结构、酶学特性及出血活性的关系进行了深入的研究。纤溶酶是一种具有溶栓、抗栓等作用的药物,已成为蛇毒蛋白领域的一个研究热点。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及性质

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及性质邢宝东殷慎敏茹炳根（北京大学生命科学学院生物化学及分子生物学系,北京１００８７１）关键词蚯蚓;纤溶酶;纤维蛋白收搞日期：１９９７－０１－２１;接收日期：１９９７－０３－２７。蚯蚓作为中药已有悠久历史,许多中医都把它作为活血药...     

蛇毒纤溶酶的药物代谢动力学研究

目的研究蛇毒纤溶酶在体内过程及药代动力学.方法以125I-蛇毒纤溶酶作示踪剂进行研究.结果静脉注射后,体内血药浓度时程曲线为二房室模型,大鼠体内T1/2β分别为6.1h(低剂量)、6.3h(中剂量)、5.6h(高剂量)、小鼠尾静脉注射后3h,各脏器中放射性活性达到峰值,其值(%)大小顺序为肾(1.34)＞肺(1.09)＞肝(0.90)=脾(0.90)＞心(0.51)＞肌肉(0.45)＞脑(0.29),125I-蛇毒纤溶酶静脉注射后72h内,尿排泄率为85.6%,粪排泄率为5.4%,胆汗排泄率为12%.结论蛇毒纤溶酶静脉注射后,体内血药浓度时程曲线为二房室模型,主要从尿排泄.     

蚯蚓纤溶酶组分的分离纯化和分析

通过以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基的亲和层析,从蚯蚓（大平二号, 即赤子爱胜蚓）纯化出的纤溶酶是一组非均一的纤维蛋白水解酶.经DEAE-纤维素离子交换和制备电泳进一步分离纯化,得到12个单一组分. 这些组分的等电点(pI)按照它们在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)图谱上的顺序从4.0开始依次降低; SDS-PAGE证明, 除3、4外,其余组分均只含一种多肽链,分子质量在22～34 ku之间;用shiff试剂和酚-硫酸染色, 显示1、2、6.5和7是糖蛋白,其中7的糖含量最高; 以BAEE、Chromozym UK和Chromozym PL为底物测定,7的纤溶酶活性最高.     

蛇毒纤溶酶的毒理学研究

目的为保证临床用药安全,对蛇毒纤溶酶进行毒理学研究.方法急性毒性实验小鼠iv给药后,统计LD50及死亡率.亚慢性毒理学实验小鼠ip给药,家兔iv给药,观察动物的一般状态、死亡率、肝功能及血常规.结果LD50为19.30±1.77u/10g,急性毒性实验中,小鼠死亡时间在24～48h.亚慢性毒理学实验动物各项指标均正常.结论蛇毒纤溶酶的临床用量是安全的.