普氏立克次氏体经鼻腔感染小白鼠后肺中产生干扰秦的初步观察

小白鼠经鼻腔感染普氏立克次氏体后,在肺组织的上清液体中能够获得一种干扰素。它对乙醚有抵抗力且不能透析;每分钟16,ooo转的离心速度尚不能使它沉淀。酸透析和碱透析以及60~C 30分钟均不能使其受到破坏。但可受到0．01％胰蛋白酶的破坏。这种干扰素对于普氏立克夹氏体和牛痘苗病毒有干扰作用,例如它能使普氏立克次氏体在家觅皮内所引起的反应推迟、减轻和反应过程的缩短;在鼠肺中的繁殖受到一定的抑制;受到普氏立克次氏体感染的脉鼠的发烧期略短,体重减轻略少,而血清中的补体结合抗体却低于对照组(未经过干扰素处理)豚鼠血清的4倍。     

普氏立克次体的组织培养II．培养普氏立克次体单层细胞的选择

本文报告了从9种组织培养中选出3种,即鼠胚皮肌细咆、鼠胚肺细胞及Detroit-6传代细胞均能使普氏立克次体发育良好。较详细地描述了此病原体在这些细胞中生长繁殖的规律,并发现其在传代细胞中增殖高峰时,能使受染细胞产生特异性的形态学变化。进一步证明普氏立克次体在细胞中的生长特点是在胞浆内繁殖,在组织培养中不能长期传代。     

恙虫病立克次氏体引起宿主细胞的组织化学改变

本文叙述应用RNA及DNA染色方法,观察恙虫病立克次氏体感染兔睾丸单层细胞后的核酸染色改变。随着感染后日数的增加,在胞浆内细胞核旁可见有规律地出现堆状排列的鲜红色RNA小颗粒,这些颗粒与恙虫病立克次氏体的排列位置一致,出现时间亦与立克次氏体的繁殖曲线平行;同时感染后的细胞浆RNA染色往往也较对照深。此外,感染后的_细胞核及核仁有时亦可见到一些不规律的改变。     

动物实验感染恙虫病立克次氏体后对变形桿菌OXK血清学反应的观察

近年来,许多人以动物血清对OXK菌株之凝集反应作为恙虫病自然疫源地调查或作为立克次氏体分离的指征之一。本文选择浙江株恙虫痈立克我氏体2株,感染小白鼠、大自鼠、豚鼠及家兔。在感染后每隔l星期取血l幺,共血清对立克次氏体补体结合试验均呈阳性反应,而对变形杆菌0xK菌株凝集反应则为阴性。根据上述结果,我们认为外斐氏(oxK菌株)反应用于恙虫病自然疫源地动物宿主的调查,或作为分离立克次氏体的一种初步指征的价值十分有限,井且还是可疑的。     

Q热立克次氏体免疫学检查法的进一步研究

应用免疫学的方法,检查Q热立克次氏体已证实具有很高的敏感性。它比常用的血清学方法补体结合试验能检出更少量的立克承氏体,而且得出的结果快。更大的特点是,做一次检查可以了解感染过程,有助于区别感染的早期或晚期,或辨别现症感染或过去感染,这是血清学方法所不能比拟的。     

恙虫热立克次体(宫崎地区分离株)在BSC—1细胞中的增殖

恙虫热立克次氏体的致病性有多种类型。从宫崎地区的恙虫病患者中分离出的立克次氏体对小白鼠致病性弱,小白鼠虽可感染发病,但不死亡,很难在腹腔内细胞或脾中发现立克次氏体。在一般恙虫热立克次氏体的研究中常用的鸡胚卵黄囊和细胞培养法中几乎不繁殖,这就使立克次     

应用亲和层析法提纯鸡马立克氏病病毒pp38基因重组产物

利用鸡马立克氏病病毒(MDV)Ⅰ型特异单克隆抗体H_(19)致敏Sepharose 4B-CNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒pp38基因重组产物,获得良好效果。提纯的蛋白质在SDS-PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在免疫印迹试验中该蛋白质条带也能被单克隆抗体H_(19)识别。利用该提纯的重组pp38免疫小鼠,所制备的小鼠抗血清在免疫荧光染色试验中不仅能与感染重组病毒的昆虫细胞Sf9反应,也能和Ⅰ型MDV型感染的鸡胚成纤维细胞反应。     

鸡马立克氏病病毒814株细菌人工染色体的构建

为构建全基因组鸡马立克氏病病毒814株感染性细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome, BAC), 首先通过构建表达Eco-gpt(xanthine-guanine phosphoribosyl transferase, XGPRT, gpt)的哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记(1.3 kb)和带有细菌人工染色体的基本功能基因序列的鸡马立克氏病病毒重组病毒转移载体pUAB-gpt-BAC11, 将重组病毒转移载体与鸡马立克氏病病毒细胞总DNA共转染鸡胚成纤维细胞, 在选择培养基中经过8轮加压筛选, 获得并纯化重组病毒; 将重组病毒细胞总DNA电转化大肠杆菌, 筛选共获得38个BAC分子克隆化病毒, 提取BAC-DNA转染鸡胚成纤维细胞以拯救重组病毒。结果表明, MDV-BAC2 DNA再次启动病毒感染, 拯救了重组鸡马立克氏病病毒。成功构建了鸡马立克氏病病毒814株基因组全长感染性细菌人工染色体, 为方便利用现代RED/ET基因重组系统对病毒进行反向遗传操作提供了技术平台; 同时为研究鸡马立克氏病病毒的基因功能和开发新型马立克氏病疫苗奠定了基础。     

鸡马立克氏病病毒814株细菌人工染色体的构建

为构建全基因组鸡马立克氏病病毒814株感染性细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome, BAC), 首先通过构建表达Eco-gpt(xanthine-guanine phosphoribosyl transferase, XGPRT, gpt)的哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记(1.3 kb)和带有细菌人工染色体的基本功能基因序列的鸡马立克氏病病毒重组病毒转移载体pUAB-gpt-BAC11, 将重组病毒转移载体与鸡马立克氏病病毒细胞总DNA共转染鸡胚成纤维细胞, 在选择培养基中经过8轮加压筛选, 获得并纯化重组病毒; 将重组病毒细胞总DNA电转化大肠杆菌, 筛选共获得38个BAC分子克隆化病毒, 提取BAC-DNA转染鸡胚成纤维细胞以拯救重组病毒。结果表明, MDV-BAC2 DNA再次启动病毒感染, 拯救了重组鸡马立克氏病病毒。成功构建了鸡马立克氏病病毒814株基因组全长感染性细菌人工染色体, 为方便利用现代RED/ET基因重组系统对病毒进行反向遗传操作提供了技术平台; 同时为研究鸡马立克氏病病毒的基因功能和开发新型马立克氏病疫苗奠定了基础。     

应用亲和层析法提纯 鸡马立克氏病病毒pp38基因重组产物

利用鸡马立克氏病病毒(MDV)1型特异单克隆抗体H19致敏Sepharose 4B—cNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒pp38基因重组产物,获得良好效果。提纯的蛋白质在SDS—PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在免疫印迹试验中该蛋白质条带也能被单克隆抗体H19识别。利用该提纯的重组pp38免疫小鼠,所制备的小鼠抗血清在免疫荧光染色试验中不仅能与感染重组病毒的昆虫细胞Sf9反应,也能和Ⅰ型MDV型感染的鸡胚成纤维细胞反应。     

小麦黄化条纹病类立克次氏体病原的初步研究

发现了小麦的一种“黄化类型”病害。病株维管束的韧皮部内有大量病原体。病原体有多种形态,大小一般约为0．5—0．8μm,并看到膜有厚薄不均的现象。四环素族抗菌素和青霉素能暂时抑制这种病害的发展。观察结果表明,小麦黄化条纹病的病原体为类立克次氏体(Ricketcslalike organism)。     

鸡马立克氏病病毒糖蛋白gB基因的表达及基因免疫

将马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)gB基因插入真核表达载体pcDNA3中,经酶切和PCR鉴定为正向插入了gB基因的重组质粒,命名为pcDNA3-gB。体外转染COS-7细胞,经间接免疫荧光染色证实转染pcDNA3-gB后的COS-7细胞内有糖蛋白B的表达。用pcDNA3-gB对从肉用雏鸡腿部肌肉注射,进行一免。间隔2周后,用pcDNA3-gB再加强免疫一次。之后2周攻毒,观察免疫保护效果。结果表明,MDV gB基因DNA免疫可以诱导鸡体产生免疫保护,免疫保护指数为72．2％。     

埃立克体与埃立克体病

埃立克体病(Ehrlichiosis)是一种人兽共患自然疫源性疾病,其病原体--埃立克体(Ehrlichiae)是一类严格寄生在单核细胞、粒细胞及血小板内的革兰阴性菌.     

I型马立克氏病毒38kD磷蛋白与Ⅱ和Ⅲ型病毒间的交叉免疫反应

由致病性Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV)特异性的单克隆抗体H_(19)制备亲和层析柱,从感染重组杆状病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞系Sf9细胞中提纯MDV的pp38基因表达产物,以此免疫小鼠制备抗血清,测定其与不同型MDV毒株感染的鸡胚成纤维细胞免疫反应性,同时也用不同型MDV毒株(HVT,Z4)制备的抗血清和自然感染发病鸡血清分别与感染重组病毒的Sf9细胞进行免疫交叉反应.试验结果表明,完整的Ⅰ型MDV来源的pp38基因产物与所试Ⅱ型Z4株和Ⅲ型HVT Fc126毒株在抗原性上有显著交叉反应.这一结果表明,在Ⅱ型和Ⅲ型MDV毒株中可能存在着pp38的类似物.     

鸡马立克氏病毒Ⅱ型无毒株Z_4的分离和鉴定

从扬州市郊区土种鸡中分离到一株血清Ⅱ型马立克氏病毒(MDV)Z4株,并进行了鉴定。初次分离时,Z4在鸡胚成纤维细胞(CEF)上生长缓慢,12天后产生以圆形大合胞体为特征的空斑形态。用Z4CEF培养物接种易感鸡,13周内不引起任何马立克氏病临床症状,也无大体的病理变化,显微镜检查仅部分鸡的坐骨神经出现炎性细胞浸润。保护性实验证明,接种Z4株的鸡可抵抗MDV强毒的致瘤作用,表明它是很有希望的疫苗候选毒株。 用型特异性单克隆抗体,对MDV强毒株京-1株、弱毒株K株,以及作者新分离的另外9个分离物进行了血清型鉴定。证实京-1株、K株和5个分离物为Ⅰ型病毒;2个为Ⅱ型病毒;另有2个分离物同时含有Ⅰ型和Ⅲ型病毒。本工作为进一步研究不同血清型MDV在我国鸡群中的流行和分布规律打下了基础。     

流行性出血热病原学的研究——Balb/c乳鼠感染病毒后鼠脑、鼠肺超微结构的观察

Balb/c乳鼠用标准病毒(EHF)H8278感染后取鼠脑、鼠肺进行电镜观察,结果证明:在鼠脑及鼠肺细胞内均发现有病毒,病毒特点:呈园形或椭园形,单位膜结构清楚,内含有比较疏松的丝状或颗粒状结构,单位膜外有微突。病毒的大小在90～120mm之间。此外在细胞浆内并发现有包涵体。     

鸡马立克氏病病毒糖蛋白gB基因的表达及基因免疫

将马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)gB基因插入真核表达载体pcDNA3中,经酶切和PCR鉴定为正向插入了gB基因的重组质粒,命名为pcDNA3-gB.体外转染COS-7细胞,经间接免疫荧光染色证实转染pcDNA3-gB后的COS-7细胞内有糖蛋白B的表达.用pcDNA3-gB对AA肉用雏鸡腿部肌肉注射,进行一免.间隔2周后,用pcDNA3-gB再加强免疫一次.之后2周攻毒,观察免疫保护效果.结果表明,MDV gB基因DNA免疫可以诱导鸡体产生免疫保护,免疫保护指数为72.2%.     

油桐尺蠖核型多角体病毒接种几种脊椎动物细胞的试验

利用昆虫病毒防治害虫,既要求有防虫效果,又必须考虑其安全性。油桐尺蠖核型多角体病毒对实验动物的致病性试验,已有报道。本文侧重于细胞水平,用油桐尺蠖核型多角体病毒接种鸡胚细胞、地鼠肾细胞及人胚肺细胞,观察病毒能否在细胞中增殖或引起细胞病理变化。     

茶花组织培养中体细胞胚状体的形成

本文研究了茶花组织培养中胚状体的形成及各种影响因素。在低浓度BA和NAA的MS培养基上,从子叶等诱导形成胚状体。组织学观察表明,胚状体起源于子叶的表皮细胞。将分离下来的胚状体转移到营养培养基上,能长成苗,并能不断增殖。液体振荡培养促进了胚状体根的生长和茎的发育,已从胚状体得到正常的小植株。     

汉坦病毒在原代人胚肾与人胚肺细胞中增殖及其特性的研究

近年来研究发现,汉坦病毒能在多种细胞株及人体细胞中增殖、适应.国内学者用人胚肺二倍体细胞(2BS)体外适应该病毒成功,但有关原代人胚肺、肾细胞的报道尚少.作者选用两株病毒及两种原代人胚细胞用于体外感染、观察,应用免疫荧光间接法及胶体金包埋前染色电镜技术对宿主细胞中增殖的病毒进行了动态观察及特异性定位研究,现报告如下.1 材料和方法1.1 细胞的分离和培养1.1.1 人胚细胞:取正常孕妇5—7个月水囊引产胚肾及肺组织,按常规方法分散细胞,5—7天后长满单层.1.1.2 非洲绿猴肾上皮细胞(VeroE6):由安徽省医学科学研究所倪大石惠赠.1.2