国产重组酵母乙型肝炎疫苗接种小学生的五年免疫效果观察

为了解国产重组酵母乙肝疫苗的免疫持久性,对接种2批国产酵母疫苗（5μg/Dose),1批进口酵母疫苗（A;10μg/Dose)和另1批进口酵母疫苗（M;5μg/Dose)的268名小学生,进行了免后5年（T60）效果随访观察。结果表明,T60时接种A疫苗组抗体GMT（几何平均滴度）（197．53）显著高于M疫苗组（110．66）和2批国产疫苗（9312645GMT78．48,9312623GMT56．06）。抗体阳转率A疫苗组（85．71％）显著高于M疫苗组及国产两批疫苗（61．76％、65．26％、63．83％）（P＜0．05）。而国产两批疫苗与M疫苗组无显著性差异（P＞0．05）。本次随访结果表明,虽然国产酵母疫苗免后5年的抗体阳转率和抗体GMT与剂量相同的进口酵母疫苗的水平相当,但抗体阳转率已降至70％以下,应考虑加强接种。     

重组(汉逊酵母)乙型肝炎疫苗副反应和抗体应答观察

观察重组(汉逊酵母)乙肝疫苗免疫儿童的副反应和抗体应答。按0、1、6月免疫程序,分别应用2批重组汉逊酵母疫苗和2批重组酿酒酵母疫苗,免疫221名6至12岁儿童,其中汉逊酵母疫苗1批(A)接种102人,另一批(B)接种26人,重组酿酒酵母疫苗1批(C)和另1批(D)分别接种74和19人。观察每次接种后的副反应和全程免疫一月后(T7)的抗体应答。儿童接种汉逊酵母疫苗后副反应发生率低,有个别出现发热反应,但均低于37.8℃,且为一过性。T7时4组儿童抗HBs血清阳转率均在96%以上,GMT范围在229.98～338.83IU/L之间。免疫A批疫苗儿童组抗体滴度(GMT)显著高于免疫C批疫苗组(270.33、229.98IU/L;P<0.05)。汉逊酵母乙肝疫苗具有较好的安全性,免疫儿童抗体应答水平较高。     

国产重组酵母乙型肝炎疫苗接种小学生的3年免疫效果观察

本文报告对２５８ 名小学生应用０、１、６ 月程序,接种２ 批国产酵母疫苗（５ μｇ／０．５ ｍ ｌ）,１ 批Ａｍ ｇｅｎ 酵母疫苗（１０ μｇ／ｍ ｌ）,１ 批Ｍ ＳＤ 酵母疫苗（５ μｇ／０．５ ｍ ｌ）的小学生免后３ 年（（Ｔ３６）效果观察。结果表明,Ｔ３６ 时抗体 ＧＭＴ（几何平均滴度）,Ａｍ ｇｅｎ 疫苗组（１４５．７５）显著高于 ２ 批国产疫苗（９２．１１、８３．５２）和Ｍ．Ｓ．Ｄ 苗组（７４．６２）,抗体ＧＭＴ 峰值显著低于Ａｍ ｇｅｎ 和Ｍ ．Ｓ．Ｄ 苗的２ 批国产酵母疫苗,与Ｍ．Ｓ．Ｄ 苗抗体ＧＭＴ 水平无显著差异（Ｐ＞ ０．０５）。抗体阳转率间各疫苗组均无显著差异（９３．１０％ ～７４．１４％ ）。本次随访结果表明,采用０,１,６ 免疫程序,国产酵母疫苗免后３ 年的抗体阳转率和抗体ＧＭＴ水平不低于进口同类酵母疫苗的水平。     

CpG对乙型肝炎基因重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响

为了研究CpG-寡脱氧核苷酸(CpG-OPN)作为佐剂对乙型肝炎基因重组(CHO细胞)疫苗(简称乙肝疫苗)免疫效果的影响,以乙肝疫苗加Al(OH)3、疫苗加CpG和疫苗加Al(OH)3与CpG3三种配伍方式,通过腹腔、皮下或肌内3种不同途径免疫Balb/c小鼠,观察不同免疫途径和不同配伍的免疫效果.同时又将疫苗与CpG混合后在4℃存放6个月再免疫小鼠,观察CpG的稳定性.结果表明:①3种免疫途径中以肌内注射效果最好,这在使用CpG的实验组尤为明显,在该组肌内免疫的ED50比腹腔的低了10倍,而诱发的抗体滴度提高了3倍;②疫苗与CpG、Al(OH)3联合使用的免疫效果最好,在肌内免疫时联合使用的免疫效果比疫苗+Al(OH)3提高4倍,比疫苗+CpG提高7倍;③疫苗+Al(OH)3免疫时,表现为IgG1抗体亚型占优势,而再加入CpG后则IgG1和IgG2a均升高,以IgG2a最显著;④疫苗与CpG混合后4℃保存半年,不影响其活性.     

重组疫苗预防乙型肝炎

自1982年Paoletti和Moss以及他们的同事们开始研究疫苗重组体的应用以来,用带其它免疫基因的疫苗病毒来达到免疫目的的想法似乎很吸引人,理论上,当把活病毒用到动物时,将表达一个插入到它的DNA上的外源基因。随后对该外源基因产物产生免疫性反应。到目前为止,重组DNA技术已成功地表达了多种疫苗抗源,包括乙型肝炎表     

乙型肝炎疫苗中游离抗原对免疫效果的影响

将按《生物制品规程》制备除氢氧化铝吸附方式不同外,其余所有过程均一致的疫苗各１０批,在ＨＢｓＡｇ含量相同前提下,于５００公升大罐内吸附制备的疫苗中游离抗原含量比在１０公升瓶内吸附制备的疫苗高４倍,两者均数分别为３０４．１ｎｇ／ｍｌ和７３．１ｎｇ／ｍｌ,吸附率分别为９７．９５％和９９．５１％;用ＲＰＨＡ测定游离抗原滴度前者也比后者高２倍;动物免疫效价（ＥＤ５０）高４７％。在上述吸附率范围内,游离抗原含量与ＥＤ５０呈正相关（ｒ＝０．７１７９Ｐ＜０．００１）。     

新生儿接种流感嗜血杆菌乙型肝炎偶联疫苗（COMVAX^TM）的安全性和免疫效果研究

将出生时接种过重组酵母乙肝疫苗的131名HBsAg阴性母亲的新生儿,随机分为两组,一组接种COMVAX^TM,另一组接种单价乙肝疫苗和单价流感嗜血杆菌偶联疫苗,出生时第一针乙肝疫苗接种后,应用2,4,13月程序免疫,在2,4月免疫后,接种COMVAX^TM组和对照组新生儿中无一例发生重度副反应,接种COMVAX^TM组新生第一针免疫前（2月）和二针免后一个月（5月）的抗－HBs阳转率分别为53．73％和95．00％,抗全GMT分别为104．10和56．29,均与接种单价组无显著差异,第二针免疫后一个月接种COMVAX^TM组96．00％新生儿抗－PRP抗体达到长期保护临界值（1.0ug/ml)水平,而接种单价流感嗜血杆菌疫苗组新生儿为95．20％,结果表明,对于健康母亲所生的新生儿,接种COMVAX^TM疫苗,抗－HBs和抗－PRP抗体阳转率及滴度均不低于接种单价疫苗组。     

广州市1992-2007年出生新生儿接种乙型肝炎疫苗免疫效果评估

为评估广州市新生儿乙型肝炎疫苗(HepB)接种纳入计划免疫管理后免疫效果。对1992-2007年出生并接种HepB的新生儿2877人,按1992-2001年和2002-2007年出生新生儿分为计划免疫管理前(Ⅰ组)、计划免疫管理后(Ⅱ组)2组,采血检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)和乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)。Ⅱ组HBsAg阳性率为0.48%比Ⅰ组的4.54%阳性率下降了80.65%,在统计学意义上有显著差异。抗-HBc阳性率也由36.07%下降为26.73%,Ⅱ组的抗-HBs阳性率为75.19%,高于I组水平。新生儿乙型肝炎疫苗纳入计划免疫管理后群体免疫效果良好,使用不同种类乙肝疫苗效果没有统计学差异。重组(酵母)乙型肝炎疫苗有较好的近期保护效果和免疫原性,与以前使用血源乙型肝炎疫苗效果相当。     

佐剂CpG-ODN与重组HBsAg疫苗联合免疫乙型肝炎病毒转基因小鼠的免疫应答研究

目的 以CpG-ODN为佐剂与重组HBsAg(rHBsAg)疫苗合用,研究其对乙型肝炎病毒转基因(HBV Tg)小鼠模型的免疫应答效果.方法 40只HBV Tg小鼠随机分为4组,每组小鼠分别注射rHBsAg疫苗(单用rHBsAg组)、rHBsAg疫苗+CpG-ODN(试验组)、rIFNα-2b(IFN组)、生理盐水(对照组).经多次免疫HBV转基因小鼠,于免疫前、后不同时间采血,动态观察各组小鼠血清中HBsAg量、抗-HBs阳性率和HBV DNA的变化,检测肝组织中HBsAg的表达.检测免疫小鼠的外周血T淋巴细胞亚群和白细胞介素2(IL-2)、IL-12(p70)以及γ干扰素(IFN-γ)的含量,分别检测免疫小鼠的脾细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤功能并计算各组小鼠肝组织活性指数(HAI).结果 rHBsAg组和rHBsAg+CpG组在免疫小鼠后2周100%诱导抗-HBs;rHBsAg+CpG组能显著降低血清中的HBsAg量或使HBsAg转阴,rHBsAg+CpG组肝组织中HBsAg的表达量与血清中一样降低,并降低血清中HBV DNA的拷贝数.rHBsAg组的CD3+、CD4+、CD8+细胞在T细胞中所占百分比,IL-2、IL-12(p70)和IFN-γ的含量以及淋巴细胞特异性增殖和杀伤效应均明显高于对照组(P＜0.05).rHBsAg+CpG组与rHBsAg组比较,免疫小鼠产生更强的HBV特异性细胞应答(P＜0.05),且以Th1型细胞免疫应答为主.在rHBsAg+CpG组肝组织中出现大量淋巴细胞,肝脏的HAI在4个组中最高.结论 CpG-ODN作为佐剂可以增强重组HBsAg疫苗诱导HBV转基因小鼠产生抗病毒免疫应答,重组HBsAg疫苗辅以CpG ODN可作为免疫治疗慢性HBV感染的可行性途经.     

重组乙肝疫苗纯度高效液相层析(HPLC)测定方法的改进

为建立重组汉逊酵母乙肝疫苗HPLC检定方法,应用TSK－G5000PW检测系统测定汉逊酵母重组乙肝疫苗表面抗原的纯度,对不同样品处理液的配比浓度和处理时间分别进行了探讨,作者选用DTT／Tween-80作为样品处理效果优于DTT＋Tween-20,1:50Tween-80与0.1mol/L等量混合为样品处理液的适宜浓度。样品处理液与等量样品混匀时间介于35s-2min时,HPLC分离效果好,结果稳定。该处理液及处理时间对CHO细胞及Merck酿酒酵母重组乙肝疫苗表面抗原的HPLC纯度测定无影响。结果表明：现有的HPLC检测系统用0.1mol/L DTT与1：50 Tween-80等量混合处理后能有效地检测不同类型重组乙肝疫苗表面抗原的纯度。     

乙型肝炎病毒DNA疫苗的研究进展

预防与控制乙型肝炎发病的乙型肝炎病毒(HBV)疫苗,是有重大的社会和经济意义。HBV的持续感染可引起慢性肝脏疾患,并逐步发展为肝硬化和肝细胞癌(HCC)。目前的乙肝重组亚单位疫苗可以使90％的接种产生保护性抗体;但是对慢性HBV携带,由于其机体对HBsAg蛋白产生耐受,不能产生体液和细胞免疫,因此它只能作为一种预防性的疫苗。DNA疫苗(基因疫苗)是一种新的疫苗技术,通过向体内递送编码抗原的细菌质粒,刺激产生特异的体液和细胞免疫反应。在小鼠和其他的肝炎病毒感染动物模型中,HBV DNA疫苗可以特异性地引起体液和细胞免疫,清除HBV转基因动物血循环中的HBsAg颗粒和HBV DNA。如果加入各种免疫调节细胞因子的基因,可以进一步提高HBV DNA疫苗的免疫效果,因此它不仅可作为预防性疫苗,也可作为治疗型疫苗。     

构建表达Flag-GPI的重组乙型肝炎病毒载体

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是小型的嗜肝DNA病毒,能够特异性地感染人肝实质细胞。HBV的易感性可以归于多个方面,包括细胞表面的受体以及细胞内的蛋白或其他因子,目前对HBV易感性的了解还有待深入。本课题利用课题组原有的HBV 5c3c载体和糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)的特性,构建了重组HBV载体5c3c-CD59-Flag-GPI和5c3cT-Flag-GPI,转染Huh7细胞后可以将Flag标签锚定在细胞膜上,且可利用Flag抗体通过流式细胞术对其进行分选。在回补HBV包膜蛋白的情况下,5c3cT-Flag-GPI能包装形成完整的重组HBV颗粒。本研究为后续优化重组HBV的包装效率,进而为HBV易感性研究提供工具并奠定基础。     

重组8型腺相关病毒介导HBV急性感染树鼩模型建立

目的利用重组8型腺相关病毒介导1.3拷贝HBV基因组（1.3HBV,ayw亚型）在树鼩肝脏表达,建立HBV急性感染树鼩模型。方法通过大腿内侧静脉注射将携带有1.3 HBV的重组8型腺相关病毒（recombi-nant adeno-associated virus 8,rAAV8-1.3HBV）导入树鼩肝脏,通过ELISA检测树鼩血清中HBsAg、HBeAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb,荧光定量PCR检测树鼩肝脏和血清中HBV DNA,全自动生化分析仪检测血清中ALT水平,并观察感染后肝脏的病变情况。结果 HBV感染主要血清标志物1～2周内均检测阳性;30 d后肝组织仍可检测到病毒抗原阳性细胞;55 d时肝组织HBV DNA拷贝数仍可达到104～105;树鼩血清中HBV DNA拷贝数持续一个月高于正常组;肝组织炎细胞略增多,血清ALT水平持续升高。结论 rAAV8所携带的HBV基因组高效专一导入树鼩肝细胞并复制表达,成功建立HBV急性感染树鼩模型,为进一步探索rAAV8树鼩慢性感染模型打下一定的基础。     

Impaired humoral immune response to hepatitis B vaccine in patients on maintenance hemodialysis

Hepatitis B virus (HBV) infection is a worldwide health problem. We aimed in this study to investigate the humoral immune response derived to HBV vaccine following completing the vaccine series in Madinah. Two hundred and two Saudi hemodialysis (HD) patients were included in this cross-sectional study. Mean concentration of Hepatitis B surface antibody (anti-HBs) was significantly higher among patients who received the vaccination twice compared to patients who received the vaccination only after starting hemodialysis (252 ± 489 mIU/mL vs. 144 ± 327 mIU/mL, respectively, p = 0.008). Almost half of the study sample were non-protected and showed anti-HBs concentration < 10 mlU/mL. In contrast, 20.3% (n = 41) were identified as poor responders (10–100 mlU/mL) and only 28.2% (n = 57) were identified as good responders (10–100 mlU/mL). However, the latter two groups were accounted as protected (48.5%, n = 98). Patients sex was associated with anti-HBs concentration (non-responders; poor responders; good responders), where significantly higher proportion of good responders were females compared to males (p = 0.007). In conclusion, HBV vaccine is efficient to elicit humoral immune response in hemodialysis patients.     

两种配方的氢氧化铝吸附基因工程乙肝疫苗的效果比较

氢氧化铝［Ａｌ（ＯＨ）３］作为ＷＨＯ 推荐的一种佐剂,已广泛应用于生物制品的各种菌疫苗制剂中。本文对两种不同配方的氢氧化铝吸附基因工程乙肝表面抗原后疫苗的效果进行比较,结果显示：三氯化铝加氢氧化钠配方制备的Ａｌ（ＯＨ）３ 配制工艺简捷,易控制工艺参数及佐剂质量,对疫苗效力的增强作用优于三氯化铝加氨水的配方。     

糖基化对乙型肝炎表面抗原疫苗的影响

哺乳动物（ＣＨＯ）细胞表达的三种糖基化程度不同的乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）Ａ（含ＧＰ３０,ＧＰ２７,Ｐ２３）,Ｂ（含ＧＰ２７及Ｐ２３）,Ｃ（只有Ｐ２３）,在免疫原性、放置后抗原的稳定性以及对不同单克隆抗体亲和力等方面都有明显的差异;（１）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后血清中抗体工（ＥＤ５０）。平均结果为Ａ＝１：８０,Ｂ＝１：１１７,Ｃ＝１：１４,表明有糖基的ＨＢｓＡｇ疫苗对小鼠的免疫力明显高于无糖基的ＨＢ     

Comparison of different elution conditions for the immunopurification of recombinant hepatitis B surface antigen

An immunoaffinity chromatographic method was developed using a mAb immunosorbent to purify recombinant hepatitis B surface antigen (r-HBsAg) from yeast. Elution conditions using a mAb-coated ELISA were improved to select the best conditions to purify r-HBsAg. The optimum results in terms of total quantitative recovery were obtained using 20 mM Tris pH 11.6. An increase in the CB.Hep-1 mAb (anti-HBsAg) useful immunosorbents half-life and in its yield per cycle was obtained when alkaline elution conditions were used. Moreover, the basic conditions do not affect either the antigenic characteristics or the purity or the molecular integrity of r-HBsAg.