IFN α2b抗流感病毒的作用

用流感病毒攻击小鼠建立动物模型,观察了重组干扰素α2b抗流感病毒的作用。小鼠采用滴鼻和腹腔注射途径分别给予40μL干扰素α2b,取40μL致死剂量(LD50)流感病毒攻击小鼠,观察IFNα2b抗流感病毒的效果。结果显示,干扰素可提高小鼠生存率。可见干扰素具有抗流感病毒的作用。     

重组人干扰素α2b抗流感病毒的研究

采用鼻腔给药方法,随机选取昆明小鼠60只,每组20只,共分3组,第1组为病毒对照组,第2组为感染前给药组即感染病毒前24h给药,第3组为同时给药组即病毒感染与用药同时进行,小鼠每天滴鼻给药1次,IFNα2b滴鼻剂剂量为10000IU/只,病毒浓度为10个EID50,对照组给予生理盐水,连续给药6d后处死小鼠,观察小鼠肺部病变,并采用血凝滴定法检测鼠肺中流感病毒含量。观察重组人干扰素α2b(IFNα2b)抗流感病毒效果,小鼠肺部病变严重程度依次为1组>3组>2组,血凝滴定结果表明,1、2与3组GMT平均值分别为4.141,2.000,2.070,重组人干扰素α2b滴鼻剂对流感病毒有明显抑制作用。     

N-乙酰半胱氨酸体外对流感病毒H1N1的抑制作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（N—acetylcysteine,NAC）在体外对流感病毒H1N1的抑制作用。方法采用MTT法、鸡胚接种法和免疫荧光法,观察NAC对流感病毒HlM的抑制作用。采用血球凝集试验、神经氨酸酶活性抑制试验和透射电镜负染技术,初步探讨NAC对流感病毒HlM的抑制机制。结果NAC在MDCK细胞上的最大无毒剂量是6．25mg／mL;流感病毒H1Nl在MDCK细胞上的半数致死感染浓度（TCID-50）为1012-2.25／100μ;在三种作用途径下（治疗性给药、预防性给药和直接灭活后给药）,NAC明显抑制了流感病毒HlNl对MDCK细胞的感染,细胞存活率分别为91．88％、93．21％、94．67％,在对照组,流感病毒H1N1感染后的细胞存活率为28．32％,两者相比差异有统计学意义（P〈0．05）;免疫荧光结果显示,与病毒对照组形成的强特异性荧光相比,三种作用途径感染MDCK细胞后的特异性荧光明显减弱;鸡胚培养法的结果显示,NAC明显抑制了流感病毒H1N1在鸡胚内的增殖,实验组血凝效价低于1：2,对照组血凝效价为1：1024;神经氨酸酶活性抑制试验和透射电镜的结果显示,NAC能够明显抑制流感病毒川N1的神经氨酸酶活性,对流感病毒H1N1的病毒体结构也有明显的破坏作用。结论NAC在体外对流感病毒川N1有明显的抑制作用,其抑制机制可能与NAC对流感病毒血凝素和神经氨酸酶活性抑制及病毒体的直接破坏有关。     

甲3型流感病毒在小白鼠肺部的繁殖

甲,型流感病毒与DEAE-D溶液同时接种鼠肺后,再用DEAE-D溶液进行鼻腔刺激,继续传若干代后,病毒很快呈现对鸡红血球有凝集作用,并使动物死亡。血凝滴度和小白鼠LD40滴度分别达1：64和5．0—6．0。用鸡胚病毒的抗血清进行抑制时,抑制滴度与鸡胚病毒相似,但是不被甲。型和仙台病毒的抗血清所抑制。 用原毒株的灭活疫苗免疫小白鼠,然后用鼠肺病毒加DEAE—D攻击,疫苗表现高的保获效价(用正常尿囊液接种作为对照)。本文讨论了利用DBAE—D刺激所获得的鼠肺病毒进行抗流感病毒的药物筛选。     

实时荧光核酸恒温检测技术（SAT）在甲型流感病毒动物模型检测中的应用

评价实时荧光核酸恒温检测技术（SAT）对H1N1和H3N2两种甲型流感病毒小鼠模型肺组织匀浆液的检测效能。小鼠滴鼻感染不同浓度H1N1、H3N2病毒液30μL,感染96h后取肺组织匀浆液分别进行SAT检测及抗原血凝效价测定。结果表明,SAT检测的病毒拷贝数基本与抗原血凝效价测定结果一致,但灵敏度提高10^4倍。与血凝实验比较,SAT检测具有灵敏度高、特异性强、结果准确、高通量自动化的优势,有利于甲型流感动物模型的建立,为实验室筛选抗甲型流感病毒药物奠定基础。     

蛋氨酸脑啡肽（MEK）抗B型流感病毒感染作用的研究

研究MEK抗B型流感病毒感染的作用。采用MDCK细胞和9～10日龄鸡胚,按不同的顺序加入不同剂量MEK和B型流感病毒,共培养72 h后做血凝实验。所有加入B型流感病毒的MDCK细胞均培养出病毒,HA滴度为1：64。在鸡胚尿囊腔中,先注入MEK孵育24 h后,再注入B型流感病毒的鸡胚也培养出病毒,HA滴度为1：6.8,与病毒对照组比较P〈0.01,有统计学意义。实验结果未见MEK直接抗B型流感病毒感染MDCK细胞株的作用,但可见MEK抗B型流感病毒感染鸡胚的作用。     

流感病毒在Vero细胞上的增殖

目的研究流感病毒在非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)上高效增殖的最适条件。方法将Vero细胞在50cm2细胞瓶或3000mL旋转瓶中培养成单层,以不同感染复数接种流感病毒,在不同的培养条件下孵育,取上清测病毒血凝滴度。结果当加入胰酶终浓度为40μg·mL-1时,低感染复数接种流感病毒,可获得高效价病毒液,在3000mL旋转培养瓶中流感病毒的易感性较在50cm2静置培养瓶中略高。结论建立了流感病毒在Vero细胞上高效增殖的初步方法。     

低剂量α干扰素口含片的抗病毒实验研究

本实验是对低剂量α干扰素口含片抗病毒实验研究,通过对各组小鼠不同的给药时间及不同的感染时间,取鼠肺制成悬液接种鸡胚,35℃培养3天,取尿囊液作血滴定,以此来验证干扰素口含片是否抗病毒以及效果如何。     

石香薷挥发油对流感A3病毒的抑制作用

评估了MCMVO体内外抗流感A3 病毒作用。在Vero细胞中测定MCMVO对流感A3 病毒所致细胞病变的抑制作用 ;在鸡胚中检测对流感A3 病毒血凝效价的抑制作用 ;在小白鼠体内测定对流感病毒性肺炎的治疗作用。结果显示 ,MCMVO在浓度大于 4.9mg/L时能有效抑制流感A3 病毒所致Vero细胞CPE。在 9日龄鸡胚中浓度为 5 0 0mg/L ,2 5 0mg/L和 5 0mg/L的MCMVO能使流感A3 病毒血凝效价由 1∶12 80分别下降到 1∶2 0 ,1∶40和1∶16 0。在给药剂量在 10 0 μg/ (g·d)以上时 ,对小鼠流感病毒性肺炎有明显的治疗作用。结果表明 ,MCMVO具有抗流感A3 病毒作用     

板蓝根颗粒对甲型流感病毒小鼠的作用

目的测定板蓝根颗粒抗流感病毒的药效作用。方法 A/California/7/2009（CA7）病毒滴鼻感染BALB/c小鼠观察14d,观察板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染小鼠的保护作用,计算小鼠存活率、存活天数以及延长生命率。感染的小鼠第5天每组小鼠处死一半,取肺组织,观察板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺组织的保护作用。结果板蓝根可明显延长甲型H1N1流感病毒感染小鼠的存活天数并提高存活率,病理结果显示板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染的小鼠的肺组织有一定程度的保护作用,与模型组比较差异显著（P〈0.05）。结论板蓝根颗粒对甲型H1N1流感病毒感染的小鼠有较好的保护作用。     

眼镜蛇毒及其组分C对大鼠实验性肝癌抗癌作用的病理学研究

目的 观察眼镜蛇毒及其组分Ｃ抗小鼠肝癌的病理学改变。方法 采用不同剂量眼镜蛇毒及其抗癌活性组分Ｃ与ＢＡＬＡ／ｃ小鼠腹水型肝癌细胞体外孵育,空白对照组用生理盐水与肝癌细胞孵育,然后取孵育液接种于小鼠前肢腋下,接种后第１０ｄ坏死,解剖取出瘤结,进行病理组织学研究。     

H5亚型流感病毒HA头部球状结构域在毕赤酵母中的高效表达及其免疫原性分析

为了研究H5亚型流感病毒HA蛋白中头部球状结构的免疫原性及其基因优化对蛋白表达的影响,本研究构建了重组真核表达载体pPICZ?A-H5HA,并将其转化至毕赤酵母,经筛选获得重组菌株。SDS-PAGE和Western blotting结果分析显示,目的蛋白可在酵母中高效分泌表达,发酵液上清中目的蛋白浓度高达0.2 mg/mL,分子量约为37kDa。将酵母发酵上清经浓缩、纯化后,获得重组目的蛋白H5HA。将不同剂量的H5HA与不同佐剂联用后分别以滴鼻和肌肉注射两种方式免疫试验动物,进行免疫效力的评价。试验结果表明,H5HA具有较好的免疫原性,可诱导SPF鸡产生较高水平的IgG (血凝抑制效价达1∶64、病毒中和抗体效价为1∶218),最佳使用剂量为50μg/羽,与白油佐剂联用时效果最佳,且肌肉注射方式的免疫效果优于滴鼻方式。研究结果为H5亚型流感病毒亚单位疫苗的研制提供了理论支撑。     

包裹R848的PS仿生脂质体增强H7N9流感病毒灭活疫苗的黏膜免疫效应

流感病毒是呼吸道传染病毒,增强疫苗接种诱导的黏膜免疫反应对于预防流感尤为重要。目前,流感病毒疫苗主要为病毒灭活疫苗,且通过肌肉注射接种,很难诱导产生黏膜免疫。为增强流感病毒灭活疫苗的黏膜免疫效果,本文利用薄膜分散法将与肺表面活性物质（PS）相似的磷脂以及胆固醇制备成包裹瑞喹莫德（R848）的PS脂质体（PS-R848）做黏膜佐剂,将该脂质体与H7N9流感病毒灭活疫苗混合后经鼻腔免疫BALB/c雌性小鼠,检测免疫指标及攻毒后的保护效果。与灭活疫苗添加R848组相比,血清中的免疫球蛋白G(Ig G)以及分型抗体Ig G1与Ig G2a效价、血凝抑制（HI）效价和支气管肺泡灌洗液分泌型Ig A(s Ig A)效价显著提高;诱导的细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)与IL-4的分泌量也显著增加。用同亚型流感病毒攻毒小鼠后的肺部病毒滴度较单独疫苗组降低,存活率达到100%,最大体重丢失率较单独疫苗组低且有显著差异。以上结果表明,R848仿生PS-R848作为黏膜佐剂可以有效提高H7N9流感病毒灭活疫苗的免疫效果,为开发流感病毒的黏膜疫苗做了数据积累。     

基因工程人干扰素α2b和α2a亚型抗病毒效应的实验研究

本文采用鸡胚接种法和微量细胞病变抑制法研究了不同亚型α干扰素（α２ａＩＦＮ和α２ｂＩＦＮ）抗流感病毒、脊髓灰质炎病毒以及麻疹病毒的作用。结果表明：两种亚型α干扰素均显示明显的抗病毒效应,其中（１）α２ｂＩＦＮ抗流感病毒作用略强于α２ａＩＦＮ,（２）两亚型α干扰素抗脊髓灰质炎和麻疹病毒作用相似。     

流感病毒感染对小鼠肠道菌群的影响及桑叶的调节作用

【摘 要】 目的 探讨流感病毒对肠道菌群的影响以及桑叶提取物在治疗小鼠流感时对肠道菌群的调节作用。方法 将36只小鼠随机分为4组,正常对照组滴鼻生理盐水,其余以流感病毒鼠肺适应株FM1滴鼻3 d,建立流感小鼠模型后,正常对照组和病毒对照组灌胃生理盐水,另2组分别以高剂量(500 mg/kg)和低剂量(100 mg/kg)灌胃桑叶提取物,连续5 d。每天检测小鼠体重,并于病毒感染前、感染后及灌胃处理后3次无菌收集小鼠粪便,培养并计数小鼠粪便中肠杆菌、肠球菌、乳酸杆菌和双歧杆菌。结果 小鼠在感染病毒后体重明显降低,桑叶提取物治疗后体重降低的趋势有所减缓。小鼠肠道菌群在感染流感后有明显的变化,但桑叶提取物治疗后肠道菌群的恢复不明显。结论 流感病毒感染能引起小鼠肠道菌群的失调,桑叶不显示调节肠道菌群的效果,表明其对流感的治疗不通过调节肠道菌群平衡来发挥作用。     

重组人干扰素α1b对呼吸道合胞病毒感染小鼠外周血T淋巴细胞亚群及肺组织病理学的影响

目的:研究重组人干扰素α1b对呼吸道合胞病毒感染小鼠外周血T淋巴细胞亚群及肺组织病理学的影响.方法:将40只BALB/c小鼠随机分为5组,分别为正常对照组、感染模型组、重组人干扰素α1b 3.125 μg剂量组、重组人干扰素α1b 12.5 μg剂量组和重组人干扰素α1b 50 μg剂量组.建立感染小鼠模型成功后,连续雾化干预5天,第6天摘眼球取血、肝素化处理,流式细胞术检测小鼠外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+水平.剖取小鼠左肺立即固定于10％中性福尔马林溶液24小时,石蜡包埋、切片行HE染色,光镜下观察小鼠肺组织病理学改变.结果:与正常对照组比较,其余各组小鼠外周血CD3+CD8+水平均显著降低,CD3+CD4+与CD3+CD4+/CD3+CD8+水平均显著升高,除重组人干扰素α1b 50 μg剂量组CD3+CD4+水平外,其余各组差异均有统计学意义(P＜0.05);与感染模型组比较,其余各组小鼠外周血CD3+CD8+水平均显著升高,CD3+CD4+与CD3+CD4+/CD3+CD8+水平均显著降低,除重组人干扰素α1b 3.125 μg剂量组CD3+CD8+水平外,其余各组差异均有统计学意义(P＜0.05);重组人干扰素α1b 3.125 μg、12.5μg、50μg剂量组间比较可见,随着药物剂量的成倍增加,CD3+CD8+水平呈递增趋势,CD3+CD4+与CD3+CD4+/CD3+CD8+水平呈递减趋势,除重组人干扰素α1b 3.125 μg与12.5 μg剂量组间P＞0.05,其余各组间差异均有统计学意义(P＜0.05).肺组织病理学观察到感染模型组小鼠肺组织炎性损伤显著,雾化吸入重组人干扰素α1b后,肺组织炎性损伤程度显著降低.结论:重组人干扰素α1b对RSV感染小鼠外周血T淋巴细胞亚群及肺组织病理学影响显著,具有良好的抗病毒及免疫调节作用,并在一定范围内存在剂量-效应关系.     

四种板兰根提取物抗流感病毒作用实验研究

目的:研究板蓝根中性、酸性、碱性以及两性的提取物抗病毒感染能力以及对人体免疫力的影响。方法:选取小鼠16只,将其随机分为四组,4只/组,采用鸡胚培养法观察板蓝根提取物对于流感病毒的抑制效果,观察四种提取物对模型小鼠脾指率、B淋巴细胞、T细胞的增殖影响。结果:通过鸡胚实验,板蓝根的酸性提取物具有显著阻滞病毒感染鸡胚功效,而且经过酸性提取物治疗小鼠其死亡率明显降低,鼠脾T细胞和B淋巴细胞刺激指数增高,其他的三种提取物均没有上述效果。结论:经过小鼠实验得出,板蓝根酸性提取物具有非常强的抑制流感病毒作用。     

森林脑炎病毒对鸡胚单层细胞的致病变作用及其实际应用

从人尸脑组织或蜱分离出的森林脑炎病毒株感染鸡胚皮肤肌单层细胞时,均可出现明显的细胞病变TCID50滴度与小白鼠脑内毒力LD50相一致,可达log 7.0—9.0。病毒如加有被确诊的森林脑炎病人恢复期血清或者免疫动物血清则不出现病变,证明细胞病变作用的特异性。病毒经鸡胚细胞传代后仍保持稳定的致病变作用。应用鸡胚细胞作血清中和试验与小鼠腹腔接种法中和试验测定的抗体结果相一致,而其敏感性和特异性都高于用小鼠法所测结果。本文对森林脑炎病毒在鸡胚细胞引起病变的条件和影响因素及其实际应用价值加以讨论。     

A/California/07/2009亚型猪流感冷适应减毒疫苗株的拯救及免疫效果评价

应用反向遗传学技术,选择冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60 ca (H2N2)型流感病毒的6个内部基因为骨架,与A/California/07/2009株流感病毒2个抗原基因HA、NA分别克隆到polⅠ-polⅡ转录表达载体pAD3000中,构建8个转录表达载体重组质粒,共转染Vero细胞,获得重配A/California/07/2009ca株流感病毒．重配病毒的TCID₅₀为7.5,病毒传4代后其血凝素(HA)滴度稳定在1∶256,半数感染剂量EID₅₀为8,鸡胚传20代,经RT-PCR鉴定未发现重组病毒基因突变,电镜观察重配病毒符合流感病毒的主要特征;蔗糖纯化的病毒经肌肉注射(灭活)及滴鼻(减毒活病毒)两种途径免疫BALB/c小鼠,结果显示：滴鼻免疫和肌肉注射都可以产生较高效价的血凝抑制(HI)抗体,肌肉注射组产生的HI抗体略高(P = 0.044),但肌肉注射组检测不到高效价IgA抗体;滴鼻免疫组鼻冲洗液中可以检测到高效价的IgA抗体,同型病毒感染后,IL-1β、TNFα、IFN-α等前炎因子分泌较早,且高于肌肉注射组(P < 0.05),可见,喷鼻减毒疫苗比灭活全病毒疫苗能更好地激发黏膜免疫反应．通过对小鼠各个器官病毒载量的检测发现,4天后鼻腔、气管、脑、肺、脾脏没有病毒存在,证明减毒活疫苗株在小鼠上是安全的．以上数据可以初步断定,重组病毒有作疫苗候选株的可能,而且喷鼻疫苗具有降低免疫剂量、同时激活体内体液免疫和细胞免疫的功能．     

季节性流感裂解疫苗在小鼠中针对同型与异型流感病毒的免疫保护效力

为了研究季节性流感裂解疫苗在小鼠中针对甲型流感病毒同型同株、同型异株、异型异株攻击的免疫保护效力及其与诱发的血凝抑制(HI)抗体滴度的关系,本研究使用我国2008~2009年度季节性流感裂解疫苗中不同剂量的甲1型流感病毒H1N1(疫苗株病毒A/Brisbane/59/2007(H1N1)-like)和甲3型流感病毒的H3N2(疫苗株病毒A/Brisbane/10/2007(H3N2)-like)疫苗组分免疫BALB/c小鼠,首先确定了能在小鼠中诱发血HI抗体滴度达到40的疫苗免疫剂量;然后以此剂量免疫小鼠,分别使用同型同株流感病毒(鼠肺适应株A/Brisbane/59/2007(H1N1)-like virus(MA))(简称A1)和同型异株流感病毒(鼠肺适应株A/Purto Rico/8/34(H1N1))(简称PR8)攻击H1N1疫苗免疫小鼠,使用异型异株流感病毒A1攻击H3N2疫苗免疫小鼠,通过体重变化和存活率情况,探讨季节性流感疫苗在小鼠中针对甲型流感病毒同型同株、同型异株、异型异株攻击的保护效力。结果显示,季节性流感裂解疫苗H1N1和H3N2组分按照HA不同剂量0.15μg、0.5μg、1.5μg、5μg和15μg免疫小鼠后,所诱发的HI抗体滴度随免疫剂量的增加而增强,1.5μgHA即可以诱发免疫小鼠HI抗体滴度达到40;以此剂量免疫小鼠,分别使用3LD50、10LD50、30LD50、100LD50、300LD50、1 000LD50和3 000LD50的同型同株流感病毒A1进行攻击,1.5μgH1N1疫苗可以100%保护小鼠抵御高至1000LD50同型同株流感病毒A1的攻击,15μg甚至可以100%保护3 000LD50同型同株流感病毒A1的攻击,但是这两个剂量免疫的小鼠在低至3LD50同型异株流感病毒PR8的攻击后都全部死亡;使用可以诱发HI抗体滴度达到140的15μg H3N2疫苗免疫小鼠,在低至3LD50异型异株流感病毒A1的攻击后亦全部死亡。以上结果表明,季节性流感疫苗可使小鼠HI抗体滴度达到40的疫苗免疫剂量为1.5μg,该免疫剂量可以有效保护小鼠抵御同型同株流感病毒的攻击,但是难以保护小鼠抵御同型异株与异型异株流感病毒的攻击,这一结果为建立以季节性流感疫苗为参考的免疫保护评价体系提供了实验依据。