金龟幼虫血细胞的防卫反应

在铜绿丽金龟Anomala corpulenta Mots.和华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita F.3龄幼虫体内注射标准剂量的日本金龟(虫甲)芽孢杆菌Bacillus popilliae,观察24小时内血细胞的反应。结果表明,昆虫种类不同,血细胞反应的方式也不相同。在敏感虫种铜绿丽金龟中,只有少数个体能在体腔内形成以浆血胞为主的黑核型囊状体;而在不敏感虫种华北大黑鳃金龟幼虫体腔内,大多数个体能形成以珠血胞为主的块状囊状体。血细胞囊状体的形成率大体上同注射感染率相吻合。本文还讨论了囊状体的形成过程及其作用机制。     

防治蛴螬的乳状芽孢杆菌——鲁乳1号的研究及应用

1977年从山东临沭县大蔡庄大队罹病的大黑鳃金龟(Holotrichia oblita Faldermann)蛴螬体内筛选出一株乳状菌的新菌系——鲁乳1号。此菌孢子囊较大(3.238×0.803微米),一端或两端具有折光性很强的伴孢体,单伴孢体大为0.78×0.57微米,双伴孢体较小,一端为0.66×0.57微米,另一端为0.54×0.43微米,芽孢为1.411×0.693微米;此菌对我国普发性金龟(虫甲)优势虫种大黑鳃金龟有较高的致病力。用喂食的方法生产菌剂已获成功。室内喂食试验致病率达65.6(38.0—100)%。田间每南用2.5万亿活芽孢时致病率为37.96(25.0—64.7)%,虫口减退率77.2(47.0—85.7)%,防治效果达68.6(43.0—83.0)%,芽孢能在土壤内长期存活,并扩散流行,是控制蛴螬危害的有效病原菌。     

乳状菌与金龟子

金龟子是为害农林等作物的重要害虫。过去应用化学药剂未能有效地控制蛴螬的为害,因而利用病原微生物进行防治是一个值得注意的途径。 病原微生物——乳状菌(Bacillus popilliae Dutky)用于防治害虫的效果仅次于苏芸金杆菌,是一种有效的微生物病原菌。乳状菌属于真细菌科、芽孢杆菌属。现在已知的有6个种及1个变种。用于害虫防治国外已做成商品供销。乳状茵对日本丽金龟(Popillia japonicaNewman)、大介壳虫等都有很好的防治效果。 乳状菌是一种兼性好气菌,但也能适应厌氧生长,在寄主昆虫体内能普遍形成孢子。在人工培养基上能够生长、繁殖,但孢子萌发率目前仅达20—30％。 据文献记载,乳状菌能寄生50多种金龟子幼虫。感染方式,大体上可分注射接种和口服感染两类。     

河北异小杆线虫一品系的分类鉴定及其对蛴螬致病力的测定

昆虫病原线虫是一种有应用潜力的地下害虫生物防治因子。本研究利用形态学特征和ITS-rDNA分析方法对从河北省沧州分离的异小杆线虫一品系进行了鉴定, 并在室内测定比较了其对蛴螬的致病力。通过对该线虫侵染期幼虫和雄性成虫主要形态学特征的参数测量, 发现其与嗜菌异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora的形态特征最为相近;同时ITS1-rDNA序列比对和系统发育学分析结果显示其与嗜菌异小杆线虫亲缘关系最近。结合形态学和分子生物学特征, 确定该线虫为嗜菌异小杆线虫沧州品系。该线虫对蛴螬（华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita、暗黑鳃金龟H. parallela和铜绿丽金龟Anomala corpulenta 3种金龟子的2龄幼虫）的致病力研究结果表明：处理72 h后, 暗黑鳃金龟幼虫死亡率显著高于另外两种金龟子幼虫 (P<0.05);处理120 h后, 暗黑鳃金龟和铜绿丽金龟幼虫的死亡率分别达到93.3%和80.0%, 二者无显著差异 (P>0.05), 可见该线虫对它们有较强的致病力。不同线虫对暗黑鳃金龟幼虫的致病力结果显示, 嗜菌异小杆线虫沧州品系侵染96 h后, 幼虫的死亡率显著高于Steinernema feltiae和S. longicaudum两种线虫的处理 (P<0.05) , 说明嗜菌异小杆线虫沧州品系的致病力显著高于另外两种线虫。     

华北大黑金龟幼虫对注射细菌的免疫反应

在华北大黑金龟三龄幼虫体腔内分别注射病原菌Bacillus popilliae及非病原菌Bacillus megaterium,观察血细胞总数(THC)和血淋巴蛋白质组分的变化。注射后15分钟,两者使THC都下降50%左右,1小时后开始回升。这时,注射非病原菌的幼虫THC上升到最高峰,约超过正常的86%。此后10小时内又经过三次下降和回升。用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定表明,注射病原菌的幼虫血淋巴会产生蛋     

日本金龟芽孢杆菌的人工培养

在日本金龟钾芽孢杆菌(Bacillus popilliae Dutky)的人工培养研究中,我们从含有硫胺素的J平板培养基上得到一个菌株——SH-m5株。这个菌株在含有鸡血的JVB培养基上长得更好。在JV液体培养基中,芽孢形成率可达50—60%。用JV培养基制备的菌剂,通过注射和喂食感染试验,对华北大黑鳃金龟,铜绿丽金龟和黄色蔗龟都有一定的致病力。     

黄绿绿僵菌Ma130821对暗黑鳃金龟幼虫的室内毒力及毒杀作用研究

采用浸渍法测定了黄绿绿僵菌Metarhizium flavoviride菌株Ma130821对暗黑鳃金龟Holotrichia parallela Motschulsky幼虫的毒力,采用室内盆栽拌土法、环施法和穴施法施用黄绿绿僵菌Ma130821分生孢子粉,测定了该菌株对暗黑鳃金龟幼虫的毒杀效果。结果表明:黄绿绿僵菌菌株Ma130821对暗黑鳃金龟3龄幼虫的侵染致病效应可利用"时间—剂量—死亡率"模型进行模拟分析和参数估计分析,侵染效应常数为0. 597。接种后第3天该菌株对暗黑鳃金龟3龄幼虫的致死剂量LC_(50)和LC_(90)的对数值分别为9. 2182±0. 2968和11. 2291±0. 4385。在6. 20×108孢子/m L黄绿绿僵菌菌悬液对暗黑鳃金龟幼虫侵染致病的LT_(50)和LT_(90)分别为1. 5 d和3. 8 d。室内盆栽拌土法、环施法和穴施法施用黄绿绿僵菌菌株Ma130821分生孢子粉对暗黑鳃金龟3龄幼虫均具有良好的毒杀作用,其中拌土法施用后对暗黑鳃金龟幼虫的毒杀效果高于其他两种方法,拌土法、环施法和穴施法施用后对暗黑鳃金龟3龄幼虫的累积死亡率分别为95. 69%、84. 35%和57. 43%,累积僵虫率分别为99. 65%、98. 65%和99. 37%。综合以上结果,黄绿绿僵菌Ma130821对暗黑鳃金龟幼虫具有良好的毒力和毒杀作用,在暗黑鳃金龟的生防制剂开发中具有良好潜力。     

嗜菌异小杆线虫侵染后暗黑鳃金龟和大黑鳃金龟幼虫脂肪体和中肠组织超微结构观察

【目的】探究昆虫病原线虫嗜菌异小杆线虫沧州品系 Heterorhabditis bacteriophora strain Cangzhou侵染对蛴螬脂肪体和中肠的影响,进一步明确其对蛴螬的致病机理。【方法】采用透射电镜技术,观察暗黑鳃金龟 Hololtrichia oblita (Faldermann)和大黑鳃金龟 H. parallela Motschulsky 2龄幼虫被嗜菌异小杆线虫沧州品系侵染后其脂肪体和中肠组织的病理变化。【结果】血腔注射感染期病原线虫嗜菌异小杆线虫沧州品系悬浮液24和48 h后,观察发现暗黑鳃金龟和大黑鳃金龟2龄幼虫脂肪体和中肠的组织结构均按时序逐渐发生变化,起初表现为脂肪球变形或变小,颜色变浅,脂肪体细胞和中肠细胞内质网、线粒体肿胀,中肠微绒毛变形脱落等现象,48 h后包裹脂肪球的膜结构破裂,脂肪体细胞和中肠细胞线粒体破裂,内质网数量减少,中肠微绒毛大量脱落,同时核内染色质大量解离,核膜破裂。【结论】经昆虫病原线虫嗜菌异小杆线虫沧州品系处理后,暗黑鳃金龟和大黑鳃金龟两种金龟甲2龄幼虫脂肪体和中肠细胞均出现明显的病理变化过程,这是嗜菌异小杆线虫高效致死蛴螬的原因之一。本研究可为昆虫病原线虫作为一种生物防治手段在蛴螬的综合防治中更好地发挥作用提供理论依据。     

侧孢芽孢杆菌对蛴螬的致病性试验

实验室培养乳状菌时,分离出一批菌株,经生理生化鉴定,与对照株侧孢芽孢杆菌一致,其特征与乳状菌有显著区别。这些培养菌株注射华北大黑鳃金龟和铜绿丽金龟幼虫,感染率可达90—100%,喂食也有一定致病力。     

利用缓病芽孢杆菌76—1菌株防治蛴螬的研究

1976年从山东荣成县崂山乡花生田罹病的蒙古丽金龟(Anomala mongolia Fald)蛴螬体内分离到一株缓病芽孢杆菌(Bacillus lentimorbus),编号为76—1菌株。此菌株对蒙古丽金龟、铜绿丽金龟等为害花生的虫种有较强的致病力(注射试验致病率分别为91％、81％;室内菌土与饲喂试验的致病率分别是28.9％、36.3％与35.6％、8.3％),田间小区试验累计达75％,大田防治效率平均为38.4％,且有长效性,施菌剂防区连续七年虫口持续下降。证明此菌株对防治花生田中丽金龟科一些蛴螬虫种有显著效果。     

THE ORIGIN OF THE ACETYLCHOLINE RELEASED FROM THE SURFACE OF THE CORTEX

—The specific radioactivity of acetylcholine liberated from the surface of the rabbit occipital cortex has been compared with that of the underlying cortical synaptosomal and vesicular acetylcholine at varying times after the administration of [N-Me-³H]choline. Choline was administered by diffusion from solutions placed in cups formed by Perspex cylinders applied to the surface of the cortex. Acetylcholine was collected by diffusion into these cups. The specific radioactivity of the acetylcholine declined progressively. The effect of stimulation of afferent cholinergic pathways was to cause a fall in the specific radioactivity of the released acetylcholine. However this was always higher than that of the synaptosomal or vesicular acetylcholine as represented by fractions P₂ and D of the authors’fractionation scheme. It is concluded that acetylcholine released from the cortex must come from a store or stores more recently synthesized than the endogenous acetylcholine of these subcellular fractions.