RolC基因的克隆及细胞分裂素在烟草中的过量表达

用ＰＣＲ方法从发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）１６０１质粒中扩增出ｒｏｌＣ基因,并构建ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动下的ｒｏｌＣ基因表达质粒ｐＣａＲ。以农杆菌介导的叶盘法,分别对野生型烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．ｃｖ．Ｗ３８）和已经异戊烯基转移酶基因（ｉｐｔ）转化的烟草进行了转化。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和ＲＮＡＤｏｔｂｌｏｔ分析表明,ｒｏｌＣ基因已转入烟草植株,并且可以正常表达。观察发现,经ｐＣａＲ转化的烟草,其形态特征与细胞分裂素过量表达时植株表现出的特征一致。用ＥＬＩＳＡ方法测定转基因烟草植株中激素含量,结果显示,单独转ｒｏｌＣ基因烟草和转ｒｏｌＣ和ｉｐｔ两个基因的烟草,细胞分裂素水平有不同程度的提高。转基因烟草表现多芽、节间距缩短等特征。     

细胞分裂素生物合成基因在调节一组烟草病理相关蛋白基因表达中…

对一组病理相关蛋白基因在烟草中的表达情况进行了研究,包括;碱性几丁质酶,β－１,３－葡萄糖苷酶,渗透蛋白及伸展蛋白。ＲＮＡ杂交实验表明在正常烟草植株中上述４个基因具有发育和器官专一性的表达。在含有细胞分裂素生物合成基因的转基因烟草丛生芽中,这４个基因的表达受过量合成的内源细胞分裂素和载体效应的共同调节,细胞分裂素降低这些基因的表达,而载体效应则促进它们的表达。     

白百利烟草愈伤组织细胞细胞分裂素结合蛋白的研究

利用BA-Sepharose 4B亲和层析技术丛白百利烟草(Nicotiana tabacum Baibaili)愈伤组织细胞分离提纯了分子量为4400±100道尔顿的细胞分裂素结合蛋白(CB-蛋白)。在细胞表面、核糖体、线粒体、叶绿体和细胞核上以及在细胞液中都有CB-蛋白存在,而核糖体上的CB-蛋白含量量高。探讨了CB-蛋白的功能。     

细胞分裂素氧化酶

对细胞分裂素氧化酶生化特征及生理意义研究进展作了介绍。     

细胞分裂素结合蛋白的研究进展

迄今为止,已从多种植物中分离到细胞分裂素结合蛋白(CBPs),它们可能在细胞分裂素的信号转导、体内运输及代谢中起作用。根据现有研究结果认为,大多数CTKs受体可能位于膜上,通过与G_蛋白耦联的信号转导系统或双组分信号转导系统完成CTKs信号的跨膜转导。少数CTKs受体可能位于细胞质中,与胞内CTKs结合后进入细胞核,直接调节基因的表达。本文综述了近年来对CBPs的研究进展,分析了CTKs受体的可能类型及CBPs作用的可能机制。     

微生物产生的细胞分裂素

微生物产生的细胞分裂素贾小明（浙江农业大学环保系,杭州３１００２９）细胞分裂素（ｃｙｔｏｋｉｎｉｎ）是一类重要的植物激素。它的主要生理功能是刺激细胞分裂,促进侧芽发育,维持蛋白质和核酸的合成,延缓离休叶片衰老等作用。细胞分裂素可用于蔬菜保鲜、防衰和延...     

有机物对盆栽苹果土壤中细胞分裂素含量的影响

施用有机物料后盆栽苹果土壤中细胞分裂素含量提高,根际土中含量高于根外土。施用秸秆的第二年效果下降,羊粪类在第三年仍有良好效果。     

细胞分裂素及其应用

细胞分裂素是目前人们已知道的五大类植物激素(即生长素、赤霉素、细胞分裂素、脱落酸和乙烯)之一,它具有腺嘌呤环结构。这类物质的共同特点是在腺嘌呤环的第六位置氨基上有特定的取代物,对细胞分裂及分化等有重要作用。细胞分裂素在植物体内多分布在细胞分裂旺盛的组织和器官中,如根尖、茎尖、未成熟的种子、萌发的种子以及正在发育的果实等。实验证明,根尖是合成细胞分裂素的场所。在高等植物中已发现的细胞分裂素有16种,其中最常见的是玉米素、玉米素核苷、二氢玉米素和异戊烯基腺苷     

琼花生殖器官结构及传粉昆虫的观察

为了探讨影响琼花Viburnum macrocephalum f.keteleeri有性生殖的因素,对其生殖生物学和传粉生物学进行了研究。研究内容主要包括琼花花部特征、生殖器官解剖结构、花粉活力、花粉胚珠比(P/O)、繁育系统、传粉形式、传粉昆虫和花粉管生长路径等。结果表明:(1)琼花聚伞花序由大型不孕花和小型可孕花组成,可孕花雌雄蕊发育正常,雄蕊5枚,雌蕊1枚,干型柱头,单子房,倒生胚珠;不孕花的雌雄蕊在发育早期正常,而在花期时退化。雄蕊退化表现为雄蕊消失、花丝缩短或消失或花药大小不一;而雌蕊退化表现为雌蕊缩小或柱头开裂;有时雌雄蕊也存在瓣化现象。(2)自然条件下,单花花粉活性在散粉4–5d后明显下降,居群花粉活力在4月25日–28日开始显著下降。(3)花粉胚珠比P/O值为12800–18700,属专性异交型;繁育系统为异株异花授粉,属虫媒传粉植物。(4)可孕花大量散粉时间为9:00–16:00,昆虫访花高峰时段为11:00–15:00,访花昆虫中以蝶类和蜂类为主,蝶类访花频率最高。(5)落置柱头的花粉萌发率较高,花粉粒授粉后1h左右开始萌发,花粉管从柱头乳突细胞的间隙穿入花柱,沿花柱中央引导组织生长,18h左右进入子房,20h左右从珠孔进入胚囊。讨论了琼花的不孕花形成、花部结构适应、花型演化趋势、低结实率和花粉管生长特点。     

烟草和枸杞属间原生质体电融合再生杂种植株

烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ．）叶肉原生质体和枸杞（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ．）悬浮细胞原生质体在适宜电场条件下能以４％ —５％ 的频率发生异质融合。用过氧化物酶和超氧歧化酶同工酶方法对随机选取的１００ 个细胞系进行分析,发现杂种愈伤组织形成频率为９％ 。其中５个杂种细胞系具有分化能力,再生出大量丛生小苗。这些小苗多数在形态上兼有双亲特征并难以生根和长大。叶片酯酶同工酶分析表明,其中２ 个杂种细胞系（ＮＬ４ 和ＮＬ８）再生苗含有一条双亲没有的重组酶带。对亲本和杂种细胞系ＮＬ４ 的细胞学观察结果表明,杂种细胞系的染色体数目为２ｎ＝ ５５—８０,明显高于亲本。对亲本及ＮＬ４ 和ＮＬ８ 愈伤组织的基因组ＤＮＡ 进行ｒＤＮＡ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交发现,ＮＬ８ 含有双亲的全部谱带,且在３．０ ｋｂ 处出现１ 条新带;ＮＬ４ 没有枸杞的特征带,但在３．０ ｋｂ 和５．５ ｋｂ 处出现２ 条新带,说明这两个杂种中的双亲ｒＤＮＡ 可能已发生分子间重组。从ＮＬ４ 愈伤组织得到４ 株形态上近似烟草的完整植株,并移栽成活     

莴苣授粉前后柱头与花柱中钙的分布变化

莴苣柱头呈两裂片状,有接受花粉的接受面和非接受面之分。授粉前后,柱头接受面乳突细胞的细胞壁中贮存丰富的细小钙颗粒,而非接受面的表皮细胞壁中的钙颗粒很少。在花柱组织中钙的分布具有明显特征,在同一水平上,钙主要分布在引导组织的质外体中,如细胞壁和细胞间隙中,而在引导组织外的薄壁组织中钙主要分布在的细胞内液炮和细胞壁中以及维管束导管内。在花柱不同水平上,花柱中的钙呈现出梯度分布,顶端各组织中的钙颗粒较少,基部各组织中的钙颗粒较多。授粉后1h花柱基部组织的钙颗粒增多,钙梯度分布现象增强。花柱引导组织中的钙梯度分布很可能是吸引花粉管向下生长的原因。讨论了莴苣花柱引导组织中钙梯度分布特征和花粉管在其体内生长的关系。     

莴苣授粉前后中央细胞中钙的分布(简报)

Ca2 作为植物生长发育过程中的必需元素之一,通过特定的时、空分布参与调控植物生长发育的诸多发育过程[1].中央细胞是胚囊中体积最大的细胞,与卵器共同构成雌性生殖单位.在被子植物双受精作用中,卵细胞与一个精细胞融合形成胚,中央细胞与另一个精细胞融合并发育成胚乳,为胚的发育提供营养.     

烟草花粉发育过程及不同组织中的内源GUS活性

以 X- gluc作为葡糖苷酸酶 ( GUS)酶反应底物 ,用酶组织化学方法检测了烟草 ( Nicotianatabacum L.)不同组织细胞的内源 GUS。在幼苗的根、茎、叶不同发育时期的花药壁、柱头、胚珠分离的生殖细胞和胚囊中 ,均未检测到内源 GUS活性。不同发育时期的烟草花粉内源GUS活性存在差异 ,在小孢子分裂前后和成熟花粉萌发前后有两个活性高峰。检测花粉内源GUS活性的适宜 p H为 5 .0 ;p H7.0的条件下未检测到内源 GUS。用 2 0 %甲醇或 0 .2mmol/L葡糖二酸内酯处理不能完全抑制内源 GUS活性     

烟草受精后胚囊和合子的分离及合子的离体分裂

以酶解－振荡、酶解－解剖及酶解－研磨３ 种方法分离出烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ）受精后生活胚囊。其中以第三种方法效果最好。将分离的胚囊经再次酶解并结合显微解剖,进一步分离出合子、胚乳细胞及其原生质体。以微室饲养法培养离体合子,启动了第一次分裂。     

烟草薄层培养器官发生的控制及细胞学观察

普通烟草(Nicotiana tabacum)花梗表皮薄层组织在不同生长素和细胞分裂素配比的MS培养基上及不同的培养条件下,可分别诱导,得到直接发生的营养芽和花芽,以及根和不发生器官分化的愈伤组织。组织间的相互联系,影响器官发育潜能的发挥。细胞学观察发现,直接发生的营养芽和花芽起源于薄层组织的亚表皮细胞层。     

烟草幼嫩花粉原生质体分离与早期离体发育

建立了两种分离烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ）幼嫩花粉原生质体的方法：一为通过花药漂浮培养释放出外壁裂开的花粉,后者转入酶液彻底脱去外壁,内壁降解而分离出原生质体（简称“花药预培养法”）;二为花粉经饥饿处理后,转入酶液释放原生质体（简称“花粉饥饿预处理法”）。对影响分离效果的主要因素作了研究。用花药预培养法分离的幼嫩花粉原生质体,在Ｋ３ 培养基中可再生细胞壁,启动１ 次细胞分裂,或萌发花粉管。表明具有孢子体发育与配子体发育的潜能。观察到花粉原生质体分裂成二细胞后,其中１ 个子细胞又长出花粉管的稀有现象,暗示其开始启动孢子体发育后又重新恢复配子体发育途径     

类根瘤对烟草叶片中叶绿体及其淀粉粒含量的影响

目的：探讨类根瘤对烟草叶片中的叶绿体及其淀粉粒含量的影响。方法：无菌培养烟草再生植株,其中一部分经过一定浓度的2,4－D与豇豆根瘤菌512快生型突变株菌液诱导处理,另外一部分为对照。运用常规电镜技术制作叶片厚切片,通过显微观察,对两组烟草叶片细胞中的叶绿体及其淀粉粒含量进行对比分析。结果：结瘤植株叶片细胞内的叶绿体含量虽然与对照之间无明显差异,但叶片栅栏组织和海绵组织细胞内淀粉粒的含量却均较对照减少,其中前者减少更为明显（P＜0.05)。结论：结瘤烟草叶片内光合产物的大量同化可能与类根瘤的形成有关。     

烟草雌性细胞原生质体的融合实验

将聚乙二醇诱导的单对原生质体融合技术应用于烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ）雌性细胞体外融合,成功地进行了雌性细胞间,雌、雄性细胞间,雌性细胞与体细胞间各种组合的融合实验。此外,应用微滴培养与微室饲养培养两种方法诱导了体细胞原生质体分裂并形成细胞团,为数目有限的性细胞融合体的培养奠定了技术基础