我国为害番茄的病毒种群与烟草花叶病毒(TMV)株系分化的初步鉴定

我国占番茄面积最大的春季露地和保护地栽培的番茄,近些年由于烟草花叶病毒(TMV)引致的病毒病发生为害,每年都程度不同地造成损失,全国番茄抗病育种协作组在确定TMV为抗病育种主攻目标的同时,以Pelham,J(1968)提出的基因对基因的相关性概念为TMV株系分类的原则,进行了全国番茄TMV株系鉴定的联合试验,鉴定结果:我国为害番茄的TMV存在着株系分化,其中只侵染感病品种(+/+)的0株系占有TMV自然群体的绝大数量,这一株系普遍存在于我国南北各地的番茄产区(重庆、兰州、西安、南京、上海、北京、吉林、哈尔滨、广州);少数地区(西安、南京、北京)出现了侵染Tm型抗病品种的1株系;能侵染Tm-2/Tm-2纯合基因品种的2侏系(南京、吉林)和能侵染Tm/Tm、Tm-2/Tm-2两个纯台基因及Tm/Tm·Tm-2~(nv)/Tm-2~(nv)复合基因品种的1.2株系(北京)仅在局部田块里分离出。随着这些TMV株系的出现,育种工作者可采取相应的对策,利用有关的抗源材料,源源不断地培育出新的抗病品种和后备材料,从而掌握了控制病害的主动权。同时,摸清病毒株系也为抗病品种的推广、合理布局提供了依据。再则,我国自国外引进大量抗TMV基因的番茄品种仅短短十乡年历史,却分离有2和1.2株系,这对我国各地近几年大面积推广种植含Tm-2抗病基因的番茄品种会带来潜在的危险。其分化原因,究竟是通过引种传入的或是株系分化现象,有待进一步探讨。     

病毒蛋白的解离和聚合作用 Ⅰ.烟草花叶病毒(TMV)的解离及其蛋白亚基的构型变化

近年来,通过对简单病毒细微结构的研究,已经揭示了病毒的一般结构原则,即许多蛋白亚基聚合成棒或廿面体,并将活性核酸包围在中心,蛋白外壳与核酸相互作用而各自得到更高的稳定性。在此我们第一次看到蛋白质分子的聚合反应在形成最原始的生命中所起的重要作用。     

烟草花叶病毒外壳蛋白嵌合基因的重组(简报)

烟草花叶病在云南烟区普遍流行。通过ELISA和RNA斑点杂交法,我们已证明云南烟区烟草花叶病毒外壳蛋白和已知RNA序列的普通烟草花叶病毒OM株同源。我们拟根据交叉保护原理,通过植物基因工程手段来培育抗烟草花叶病的烟草新品种。为此,对OM株外壳蛋白基因进行了下述重组工作。 首先,我们对OM株外壳蛋白基因工作,得到C-DNA株pCK501。然后,切取其中带外壳蛋白基因的667bp Hinf Ⅰ片段,导入带花椰菜花叶病毒35S启动子和3′未端质粒pDH51的聚核苷酸接头中,组成带烟草花叶病毒外壳蛋白基因的嵌合基因的重组质粒pCK401。又把整个嵌合基因导入pGV1103 neo,和嵌合的新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPTⅡ)基因及新霉素磷酸转移酶Ⅰ(NPT Ⅰ)基因相连接,组成中间载体pCK403。最后在大肠杆菌GJ23帮助下,把pCK403导入土壤杆菌,和土壤杆菌中原有的去了致瘤基因的Ti载体pGV3850的T-DNA区pBR322片段进行同源重组,把嵌合基因导入Ti质粒的T-DNA区,得到pACK403。     

表达黄瓜花叶病毒卫星RNA的转基因烟草耐烟草花叶病毒

表达黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA的转基因烟草可以抗CMV的侵染.为了决定这些植物对其它病毒,如烟草花叶病毒(CMV)的安全性,我们对这些植物接种CMV.结果发现 卫星RNA可减弱TMV引起的症状,井降低病情指数,然而却对TMV在植物中的积累没有明显影响.这一发现有助于对卫星RNA抗病机制的理解,有助于含卫星RNA的生防制剂及表达病毒卫星RNA的转基因植物的应用.本文在国际上首次报道卫星RNA可减弱非相关病毒引起的症状.1 材料和方法1.1 病毒及植物烟草花叶病毒(TMV),烟草G140种子及枯班三生烟种子均为中国科学院微生物研究所病毒室保存;含黄瓜花叶病毒卫星RNA-R1基因的烟草G140(烟Sat-G140)为中国科学院微生物研究所病毒室培育,所用材料为第三代种子.     

表达黄瓜花叶病毒卫星RNA的转基因烟草耐烟草花叶病毒

表达黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA的转基因烟草可以抗CMV的侵染.为了决定这些植物对其它病毒,如烟草花叶病毒(CMV)的安全性,我们对这些植物接种CMV.结果发现 卫星RNA可减弱TMV引起的症状,井降低病情指数,然而却对TMV在植物中的积累没有明显影响.这一发现有助于对卫星RNA抗病机制的理解,有助于含卫星RNA的生防制剂及表达病毒卫星RNA的转基因植物的应用.本文在国际上首次报道卫星RNA可减弱非相关病毒引起的症状.1 材料和方法1.1 病毒及植物烟草花叶病毒(TMV),烟草G140种子及枯班三生烟种子均为中国科学院微生物研究所病毒室保存;含黄瓜花叶病毒卫星RNA-R1基因的烟草G140(烟Sat-G140)为中国科学院微生物研究所病毒室培育,所用材料为第三代种子.     

关于"烟草花叶病毒的感染和重建实验"的几个疑惑点探析

烟草花叶病毒的感染和重建实验是证明核酸是遗传物质的证据链中关键的一环.主要以科学家最初发表的2篇相关研究论文为依据,对学生在学习烟草花叶病毒的感染和重建实验过程中,经常产生的如何进行烟草花叶病毒感染烟草的操作、如何将烟草花叶病毒的RNA与蛋白质相互分离、如何实现烟草花叶病毒的体外重建3个疑惑点进行探析.     

烟草抗TMV基因工程的研究进展

烟草花叶病毒病是一种危害严重的世界性病害,可大幅度降低烟草的产量和品质.研究和探索防治烟草花叶病毒病的新技术、新途径已成为众多研究者普遍关注的焦点.分子生物学的发展,特别是基因工程的发展为防治该病毒病带来了希望.本文综述了目前普遍采用的几种烟草抗TM V基因工程策略的研究现状及评价.     

广东烟草花叶病毒株系研究

烟草花叶病毒（TMV）引起的烟草花叶病在广东不同的烟草主产区存在着症状的差异。从广东梅州和南雄烟区采集的138个TMV标样中,选取6个不同症状的分离物作为研究对象,发现它们在不同种属寄主和不同烟草品种上表现明显的TMV普通株特征症状,虽然在某些寄主上其症状也有一些差异,但未能反映株系间的差异。这6个分离物具有几乎相同的病毒粒体形态、电泳迁移率、钝化温度以及紫外吸收特征。经琼脂双扩散法和间接ELISA法的血清学反应,表明它们具较强的血清学关系。因而它们有很强的同源性。经病毒粒体外壳蛋白的氨基酸分析,在氨基酸总数上,分离物GD1和GD3各有156个氨基酸．GD2和GD4各有159个,GD5和GD6分别有158和157个氨基酸。上述分析试验结果初步表明,在广东不同烟草主产区引起的症状有所差异的6个分离物均属IMV普通株。     

烟草花叶病毒提纯的改良程序

植物病毒的分离和提纯是研究植物病毒病不可缺少的步骤。病毒粒体的纯化一般有三个要求:一是纯度高,二是产量高,三是方法简便易行。烟草花叶病毒(TMV)的侵染寄主广泛,是农作物的要病原毒。因此,它在植物病毒病研究中,占有相当重要的地位。超离心机的问世,对提高 TMV 的纯化程度和产量提供了有利的条件。但在不具备超     

检测烟草中烟草花叶病毒的RNA斑点杂交法

用普通烟草花叶病毒OM株3′-端约2kb的cDNA为探针,探索了用RNA斑点杂交法对烟草组织中烟草花叶病毒RNA进行检测的条件。这些条件包括用分子杂交法观察云南烟区和上海烟草上分到的烟草花叶病毒与OM株的同源性,从烟草组织中提取烟草花叶病毒的几种方法的比较,使RNA有效地固定在硝酸纤维素滤膜上的方法,烟草组织中是否有干扰RNA固定和杂交的物质,斑点杂交方法检测烟草花叶病毒的特异性、灵敏度等。     

侵染蚕豆的烟草花叶病毒研究

１９９３年４月从杭州蚕豆田病株上分离获得病毒分离物Ｂ－９３５Ａ,汁液摩擦接种５科１９种植物,Ｂ－９３５Ａ能侵染３科１２种植物。被侵染的蚕豆产生黄斑、花叶,后期叶片黄化并有坏列;在菜豆上产生局部枯斑。Ｂ－９３５Ａ的钝化温度为８５－９０摄氏度,稀释限点为１０＾－８－１０＾－７。病毒粒体杆状,平均长度约３０ｎｍ,病毒的衣壳蛋白亚基只有一条多肽链,分子量约为１７．５ＫＤ,包裹的核酸为单链ＲＮＡ,长约６．４     

从烟草上分离的黄瓜花叶病毒

黄瓜花叶病毒(CMV)危害烟草已成为烟区严重病害之一,如山东烟区CMV引起的烟草病毒病发病率达50%以上。CMV在福建烟区的发病率也达15～30%。上述调查系根据烟草田间症状表现以及温室内不同鉴别寄主的反应和抗性测定得到。为了进一步     

杏鲍菇抗烟草花叶病毒蛋白的筛选

采用离子交换层析和凝胶层析方法,从杏鲍菇干样中分离得到多个蛋白组分,经枯斑寄主检测,发现多个蛋白组分都有抗烟草花叶病毒(TMV)的活性,对TMV的抑制率均在70%以上,高者可达99%。其中xb68Ab已得到了纯化,分子量约为23.7kD,在心叶烟和苋色藜上它对TMV侵染的抑制率分别达到99.43%和98.9%。     

烟草花叶病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用TMV免疫的BALB/c鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,获得10株能稳定传代並分泌抗烟草花叶病毒(TMV)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其中T73McAb滴度最高,ELISA滴度高达1/655,360,能被TMV兔免疫血清所阻断,能中和TMV的感染性。但与其它植物病毒无交叉反应,与TMV不同毒株均有反应。     

从烟草上分离的黄瓜花叶病毒

黄瓜花叶病毒(CMV)危害烟草已成为烟区严重病害之一,如山东烟区CMV 引起的烟草病毒病发病率达50%以上。GMV 在福建烟区的发病率也达15～30%。上述调查系根据烟草田间症状表现以及温室内不同鉴别寄主的反应和抗性测定得到。为了进一步研究与肯定CMV 引起的烟草病毒病,有必要由病株分离病毒和进行电子显微镜观察鉴定。     

烟草—烟草花叶病毒互作中的质膜NADPH氧化酶

以NN烟草(NicotianatabacumL.)品种“SamsunNN”(与烟草花叶病毒(TMV)发生非亲和互作)和普通烟草(N.tabacumL.)“3002”品种(与TMV发生亲和互作)叶片为材料,采用差速离心法和两相法制备密闭的正向型质膜(PM)囊泡。用SOD敏感的依赖于NADPH的Cytc的还原表示质膜NADPH氧化酶产生超氧阴离子(O-·2)的活性。加入0.01%TritonX_100可使酶活性提高约80%,证明NADPH结合位点在质膜电子载体蛋白胞质结构域上,而O-·2在质膜外侧生成,在反应过程中发生了跨质膜的电子传递。质膜NADPH氧化酶的活性可部分地被哺乳动物NADPH氧化酶的专一性抑制剂DPI(diphenyleneiodonium)抑制,最大抑制达70%。受TMV侵染后,NN烟草NADPH氧化酶活性显著升高,而普通烟草的酶活性基本不变。对质膜NADPH氧化酶在烟草_TMV互作早期活性氧生成和启动过敏反应中的作用展开讨论