降钙素的基因结构与表达调控

降钙素与降钙素基因相关肽（ＣＴ／ＣＧＲＰ）基因编码一组多肽,即降钙素（ＣＴ）、降钙素的Ｎ端肽和Ｃ端肽、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）及淀粉不溶素（Ａｍｙｌｉｎ）。ＣＴ／ＣＧＲＰ基因转录而成的ｍＲＮＡ前体,在不同组分中通过选择性加工形成ＣＴ ｍＲＮＡ或ＣＧＲＰｍＲＮＡ,再通过翻译及蛋白质加工,最后形成成熟的降钙素或降钙素基因相关肽。本简单介绍一下降钙素的基因结构及表达调控方面的研究进展。     

葡萄F-box基因VvF-box5基因结构与表达分析

F-box蛋白广泛存在于真核生物中,主要参与细胞周期调控、凋亡及多种激素信号转导等过程;近几年发现,F-box蛋白还介导了植物对逆境胁迫的应答响应,对维持植物正常生长发育至关重要。干旱等非生物逆境胁迫严重影响了葡萄正常生长发育和果实品质,克隆并分析干旱响应基因对改良葡萄的抗性有重要意义。本研究根据葡萄干旱转录组分析结果,发现11个F-box基因在干旱胁迫下表达量明显上调;其中,VvF-box5基因位于葡萄第19条染色体上,对干旱胁迫的响应明显高于其他F-box成员;VvF-box5基因含有5个外显子和4个内含子,内含子均含有保守的GT…AG序列;VvF-box5基因包含1824 bp的开放阅读框,编码607个氨基酸,氨基酸序列的N端含有1个保守的F-box结构域,C端包含1个FBD和2个LRR结构域。启动子元件分析表明,VvF-box5基因含有多种逆境应答元件,包括GA响应元件GARE-motif、MeJA响应元件CGTCA-motif、干旱胁迫相关元件ERE、HSE和LTR、光应答顺式作用元件ACE、Box4和Sp1以及与细胞周期调节和发育相关的原件等。实时荧光定量PCR结果显示,在干旱、高盐、ABA和MeJA处理下,VvF-box5基因的表达量明显升高;亚细胞定位结果显示,VvF-box5蛋白主要定位于圆葱表皮细胞的细胞核中;VvF-box5的过表达明显提高了转基因拟南芥在干旱处理下的成活率。另外,本研究利用原核表达系统诱导6×His-VvF-box5融合蛋白的表达,并使用蛋白标记亲和层析柱纯化获得了6×His-VvF-box5融合蛋白,为下一步深入研究VvF-box5的功能鉴定基础。     

植物基因的克隆、结构与表达

一、引言 分子克隆根据从一个异质的DNA分子群,经体外DNA重组分子的构成、选择和扩增,得到一个所需的同质分子的原则,使生物学家过去想从真核生物庞大的基因组(10~9数量级的核苷酸)里分离出特定的一个DNA片段来进行研究成为可能。     

CD59的基因结构与表达调控

ＣＤ５９基因含５个外显子,属于ＵＰＡＲ／Ｌｙ－６超家族成员。该家族基因结构保守,但它们表达蛋白质具有广泛的生物学功能,ＣＤ５９分子有组成性和诱导性表达两种表达方式,顺式作用元件及反式作用蛋白质协调作用决定着基因表达的特生。     

葡萄F-box基因VvF-box5的基因结构与表达分析

F-box蛋白广泛存在于真核生物中,主要参与细胞周期调控、凋亡及多种激素信号转导等过程;近几年发现,F-box蛋白还介导了植物对逆境胁迫的应答响应,对维持植物正常生长发育至关重要。干旱等非生物逆境胁迫严重影响了葡萄正常生长发育和果实品质,克隆并分析干旱响应基因对改良葡萄的抗性有重要意义。本研究根据葡萄干旱转录组分析结果,发现11个F-box基因在干旱胁迫下表达量明显上调;其中,Vv F-box5基因位于葡萄第19条染色体上,对干旱胁迫的响应明显高于其他F-box成员;Vv F-box5基因含有5个外显子和4个内含子,内含子均含有保守的GT…AG序列;Vv F-box5基因包含1824 bp的开放阅读框,编码607个氨基酸,氨基酸序列的N端含有1个保守的F-box结构域,C端包含1个FBD和2个LRR结构域。启动子元件分析表明,Vv F-box5基因含有多种逆境应答元件,包括GA响应元件GARE-motif、Me JA响应元件CGTCAmotif、干旱胁迫相关元件ERE、HSE和LTR、光应答顺式作用元件ACE、Box4和Sp1以及与细胞周期调节和发育相关的元件等。实时荧光定量PCR结果显示,在干旱、高盐、ABA和Me JA处理下,Vv F-box5基因的表达量明显升高;亚细胞定位结果显示,Vv F-box5蛋白主要定位于洋葱表皮细胞的细胞核中;Vv F-box5的过表达明显提高了转基因拟南芥在干旱处理下的成活率。另外,本研究利用原核表达系统诱导6×His-Vv F-box5融合蛋白的表达,并使用蛋白标记亲和层析柱纯化获得了6×HisVv F-box5融合蛋白,为下一步深入研究Vv F-box5的功能奠定基础。     

《基因转移和表达:实验室手册》

《基因转移和表达:实验室手册》(Gene transfer and expression:a laboratorymanual)由Michael Kriegler著,1990年Stockton出版社出版,242页。该书是本综合性手册,描述了外源基因导入哺乳动物细胞最佳表达,病毒和细胞顺式作用成份及最新颖的表达载体。其中包括选择转移基因导入哺乳动物最优程序、基因转移和表达的分析。它详细地叙述了制备细胞和细胞系的基本技术;DNA转移技术;药物筛选和基因放大技术;表达克隆;减性杂交及逆病毒—传递基因转移技术。其它还有应用同位素和非     

北京油鸡purH基因结构与表达特征研究

提取北京油鸡8种组织的总RNA,利用RT-PCR检测purH基因mRNA的差异表达。将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-purH,利用脂质体介导法将其导入北京油鸡体外培养细胞中,进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明：北京油鸡purH基因（GenBank 登录号：EU334506）编码区为1782 bp,编码 593 aa的多肽,转染后24 h、48 h和72 h,pEGFP-purH转染率在10.3 %～53.2 %之间,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中,随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFP-purH融合蛋白的克隆细胞株,RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-purH已整合到北京油鸡成纤维细胞基因组中,在优化的条件下,阳性细胞凋亡率、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著（P 〉0.05）。     

松材线虫TAX家族基因结构与表达模式分析

【目的】本研究旨在通过对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus TAX家族成员的理化性质、结构和功能及药物和低温胁迫后的TAX家族基因Bx-taxs表达情况进行分析;探究松材线虫化学趋性和温度趋性。【方法】基于NCBI数据库调取秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans的TAX家族基因序列与松材线虫基因组进行tBlastn比对搜索;调取松材线虫TAX家族候选基因。通过ExPASy, WoLF PSORT, SOPMA, Alphafold 3, MEME, CD-Search和TBtools等软件和在线工具对候选序列进行筛选和清洗;鉴定松材线虫Bx-taxs并分析基因结构和染色体定位及其蛋白的亚细胞定位、序列特征、理化性质、二级结构和三级结构。利用IQtree构建TAX家族蛋白序列系统发育树推断亲缘进化关系。对松材线虫在甲维盐药物胁迫和低温胁迫下6个Bx-tax的表达谱进行分析;确定TAX家族成员在响应外界胁迫中的作用。【结果】共鉴定出6个松材线虫TAX家族成员Bx-TAX-1-6; 这些蛋白长度为623-1 115个氨基酸残基;相对分子质量为71.49-129.27 kD;理论等电点在5.68-9.04之间;多数为亲水性蛋白。6个TAX家族成员均位于细胞膜上;特别地是Bx-TAX-1还分布于细胞质中。TAX家族蛋白的二级结构以α-螺旋与无规则卷曲为主要组成部分;占比分别为42.10%-53.07%与32.38%-45.80%。染色体定位和系统发育分析表明;松材线虫TAX家族基因共分布于4个染色体上;其中除了Bx-TAX-1基因单独为一个分支;其他TAX基因与线虫的TAX-4基因更为接近。在甲维盐胁迫下;12 h内松材线虫TAX家族成员基因均出现了不同程度的表达下调的现象;在24 h时均出现了不同程度的表达上调的现象;其中Bx-tax-3; Bx-tax-5和Bx-tax-6的表达量上调或下调均超过1倍;在低温胁迫下;仅有Bx-tax-5上调;其他基因均为下调。【结论】松材线虫TAX家族基因对甲维盐和低温胁迫表现出不同程度的响应。本研究结果为基于TAX家族开展的化学和温度趋性研究提供了理论依据;为研究松材线虫响应药剂胁迫和北迁机制提供基础。     

玉米黑粉菌cyp51基因结构分析与克隆表达

通过生物信息学手段分析cyp51基因结构,并根据GenBank登记的玉米黑粉茼cyp51 DNA序列,设计cyp51引物和两对分别截短不同跨膜区的突变体引物,构建了多种重组表达质粒及突变体重组表达质粒.选用不同宿主菌包括Escherichia coli BL21(DE3).BL21(DE3)pLysS和Rosetta(DE3)诱导表达并优化条件.SDS-PAGE分析结果表明:只有突变体pET32-YH-35能够在E. coli BL21(DE3)中高效表达(30℃,0.5 mmol/L IPRG诱导).通过与戊唑醇等4种商品化杀菌剂农药和14种XF系列农药先导化合物的紫外结合光谱分析表明:重组蛋白具有生物学活性.其中一种XF系列化合物的结合常数接近商品化杀菌剂,有可能开发为新的杀菌剂,为设计开发新型高效抗真菌新药提供了理论依据.     

《神经科学期刊》：研究发现神经递质与神经肽受体基因特异表达

近日,《神经科学期刊》（TheJournalofNeuroscience）发表了中科院上海生命科学研究院神经所神经发育及其调控机理研究组的论文”Tlxl／3andPtflacontroltheexpressionofdistinctsetsoftransmitterandpeptidereceptorgenesinthedevelopingdorsalspinalcord”。该研究结果揭示了决定神经元命运的转录因子同时也决定了神经元中特异表达的神经递质与神经肽受体的表达。这为认识神经元的发育调控及神经环路的形成机制提供了新的视角。     

玉米亚硫酸氧化酶基因的克隆及其结构与表达分析

为明确亚硫酸氧化酶(sulfite oxidase,SO)基因的结构特征和进化关系及其在玉米不同组织器官发育过程中的表达和分布特性,采用RACE技术克隆了玉米SO基因(ZmSO)的全长cDNA。序列分析表明,获得的ZmSO全长1 492bp,其中5′-UTR 160bp,3′-UTR 138bp,开放阅读框为1 194bp,编码397个氨基酸组成的蛋白质。对该基因编码氨基酸保守结构域的分析发现,ZmSO包含1个钼辅因子结合域、1个自身二聚化域和1个过氧化物体靶信号序列。系统进化分析显示,SO在进化上较为保守,玉米与其它植物的SO相似性较高。荧光定量RT-PCR分析表明,在玉米成株期,根、茎、叶、雄花和幼穗中,ZmSO在根部表达丰度最低,在叶片和幼穗中表达量较高。酶活性测定结果显示,不同器官中SO活性与其mRNA转录水平上的表达趋势相似。     

《基因Ⅻ》

正原版全彩色印刷出版:高等教育出版社出版时间:2018年01月ISBN:978-7-04-048689-6定价:428.00元页数:838页内容简介由Lewin所编撰的《基因》被广泛认为是\"分子生物学\"教科书中的精髓。长久以来,《基因》不断以最新颖、最现代的方式向广大读者展现着富于多变且充满活力的生物科学知识,被认为是学习分子生物学和遗传学的首选教材。现今,《基因Ⅻ》出版问世,这本经典教材延续以往的编写风格,展现生物科学的最新信息、生物科学     

北京油鸡α1-AGP基因结构与表达特征研究

提取北京油鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌等不同组织的总RNA, 利用RT-PCR方法检测a1-酸性糖蛋白基因(a1-AGP)mRNA的差异表达。将a1-AGP基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-C1, 构建带有GFP报告基因的重组表达载体pEGFP-α1-AGP, 将其导入北京油鸡体外培养细胞中, 并进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明: a1-AGP基因开放阅读框长度为612 bp, 编码203个氨基酸, 在北京油鸡肝、肺、腿肌和胸肌中有表达; 转染后24、48和72 h, pEGFP- a1-AGP转染率在31.3%~47.6%之间, 绿色荧光主要集中在细胞核中, 随着表达量的增加, 绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状, 经药物筛选和克隆化培养, 获得表达pEGFP-a1-AGP融合蛋白的阳性克隆细胞株, 利用RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-α1-AGP已整合到北京油鸡成纤维细胞的基因组中, 在优化的条件下, 阳性细胞凋亡率、形态、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P >0.05)。     

逆境胁迫诱导基因的结构,功能与表达调控

对有关逆境响应基因的最新进展作了一简要的综述,在逆境条件下,脱落酸（ＡＢＡ）浓度增加,诱导许多新的基因表达及蛋白质合成,已克隆到几百种逆境响应基因,其中大多数可受外源ＡＢＡ的诱导,对这些基因及蛋白质的功能已有所了解,认为它们可能与的抗逆能力有关,目前认为有多条信号传递途径参与胁迫信号的转导。     

《基因Ⅺ》

<正>出版日期:2014年5月定价:398.00元字数:180万内容简介分子生物学是一门发展迅速的学科,其知识更新之快及前沿的蓬勃发展,对人类生活产生了持久而深入的影响。Lewin的《基因》自问世以来,一