茶树咖啡碱合成酶基因原核表达、及其抗体制备与鉴定

克隆出茶树咖啡碱合成酶基因,对其进行原核表达,并制备TCS1抗体,旨在从蛋白水平研究茶树体内TCS1的表达情况。根据Gen Bank登陆的TCS1基因的全长c DNA序列,找出其完整的ORF(开放阅读框),从茶树叶片c DNA中克隆了TCS1基因的开放阅读框,连接到p GEX-4T-2表达载体,经IPTG诱导表达重组蛋白p GEX-4T-2-TCS1。进行体外酶活检测后,亲和层析纯化重组蛋白,作为抗原免疫家兔,制备TCS1多克隆抗体。用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性。通过优化诱导条件,得出重组蛋白的最佳表达条件为:30℃、4 h。诱导后的总蛋白、可溶性蛋白与包涵体蛋白均出现一条明显的外源蛋白条带。抗体经ELISA检测,效价为1∶2 000,Western blot检测表明抗体具有相对较好的特异性。构建了TCS1原核表达质粒,同时成功制备了抗TCS1的多克隆抗体。     

植物次生物质的抗虫作用

植物适应环境的方式多种多样,其中通过影响体内代谢,形成千差万别的次生物质,来产生对逆境的抵抗,就是一个重要方面。一些次生物质,如树脂、橡胶、多胺、烟碱、黄酮、醌类、皂苷等,人们早就认识到它们在人体内可以发挥许多重要的药理作用,是一些植物药所以能治疗疾病的有效成分,但对于它们在植物体内所行使的生理功能,长时期并不十分清楚,以致以往人们一般都认为它们不过是植物在进行各种代谢的途径中所形成的废弃物质。随着科学的发展,人们通过长期观察和各种试验逐渐证明,次生物质是植物长期进化的产物,在植物适应环境、提高竞争能力方面起着十分重要的作用。本文仅就次生物质在植物抵抗     

白化和黄化茶树品种绿茶游离氨基酸、儿茶素类及咖啡碱差异分析

为探究以白化和黄化茶树品种鲜叶为原料制成的绿茶滋味品质和代谢物差异,对广德市6个白化品种绿茶(奶白茶)和14个黄化品种绿茶(黄金芽茶)进行感官审评和代谢物分析。结果表明,奶白茶滋味鲜爽而收敛性略弱;黄金芽茶滋味收敛性强而鲜度低于奶白茶。游离氨基酸总量以及呈现鲜味、甜味的游离氨基酸在奶白茶中的含量显著高于黄金芽茶,而贡献收敛性的儿茶素类化合物和没食子酸含量以及呈现苦味的咖啡碱含量在奶白茶中显著低于黄金芽茶。偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)表明导致两种绿茶滋味差异的标志性化合物有7种,分别是茶氨酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸酯和咖啡碱。味觉活性值(Dot)最高的EGCG在黄金芽茶中的呈味贡献显著高于奶白茶。因此,游离氨基酸、儿茶素类化合物、没食子酸和咖啡碱含量差异导致白化和黄化茶树品种绿茶滋味不同。     

抗虫基因的抗虫原理及其应用现状和展望

对目前植物抗虫基因工程中广泛应用的几个抗虫基因的抗虫原理及应用现状作了概述,并讨论了可能出现的问题和相应的对策。     

转双抗虫基因烟草的研究

用改造的雪花莲凝集素基因GNAmm与合成的苏云金芽孢杆菌(Bt)毒蛋白cry1Ac基因构建了带有双价基因的植物表达载体,在该表达载体中这两个基因的转录分别受笋瓜PP2启动子(SPP2P)和CaMV 35S启动子的调控。通过根癌土壤杆菌介导转化法,获得了一批抗卡那霉素的转化再生烟草植株。PCR检测及基因组DNA Southern blot,Slot blot杂交分析的结果表明Gna基因和Bt基因已整合到烟草总DNA中。用Bt毒蛋白抗血清进行Western blot分析,转基因植株均有Bt杀虫蛋白的不同程度的表达。对转化再生烟草的虫试结果表明,在所受试的19株烟草中60%的植株上的棉铃虫在5天内死亡率达到100%,而且存活幼虫的生长发育受到明显抑制;蚜虫抑制生长试验表明,多数转化再生植株具有较强的抗蚜活性,平均能够抑制桃蚜50%～60%的蚜口密度,有的高达80%以上。以上结果表明利用这两个改造过的抗虫基因可以获得既抗虫又耐蚜的转双抗虫转基因植物。     

6种常饮茶咖啡碱含量的差异性研究

本文以常见的6种饮用茶为实验原料,用95%乙醇提取(恒压滴液漏斗)—升华法对其咖啡碱进行提取,并进行含量测定。结果表明:安顺毛峰咖啡碱含量为0.784%,都匀毛尖咖啡碱含量为0.855%;红茶中的滇红的咖啡碱含量为1.143%,英红的咖啡碱含量为1.275%;花茶中的茉莉花茶咖啡碱的含量为0.434%,菊花茶的咖啡碱含量为0.382%。对不同类型的茶叶而言,咖啡碱的含量红茶绿茶花茶。     

牛蒡抗虫活性及抗虫成分的初步研究

为进一步开发牛蒡在生物抗虫农药方面的应用价值,对牛蒡提取物进行了抗卤虫活性测试,并对抗虫活性较强的组分进行GC-MS分析.将健康新鲜的牛蒡的乙醇粗提取物经水分散,分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,对石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水四相提取物分别进行活性检测,结果表明它们对卤虫的半致死浓度IC50分别为0.13、0.17、1.25、0.19 mg·mL-1,其中石油醚相杀虫效果最好.对石油醚相的化学成分进行分析,共检测出51种成分,鉴定了其中39个化合物并测定了其相对含量,其中主要成分为棕榈酸乙酯(27.791％)、萜类化合物(21.311％)、饱和烃类(19.637％),这三类物质相对含量之和占总提取物的68.739％.     

植物蛋白酶抑制素抗虫作用的研究进展

植物自身为抵抗昆虫等的为害,在长期进化过程中形成了复杂的化学防御体系,其中起主导作用的是一些植物化学物质。这些化合物能影响昆虫（或其它有机体）的生长、行为和群体生物学,因而又称为它感素（allelochemics）[1～3]。大多数它感素为植物的利己素,可以单一或协同对害虫起作用,构成植物的抗虫性。根据植物对昆虫取食的反应,可将植物的化学防御概括为两类：一类是组成型防御[4],即抗虫物质不依赖于昆虫的取食而存在于植物组织中;另一类是诱导型防御[5～9],即植物仅当昆虫取食时才大量合成抗虫物质。诱导型抗虫物质当然亦可以组…     

普洱茶后发酵中咖啡碱变化研究进展(综述)

普洱茶（熟茶）的后发酵加工工艺,是形成其独特品质特征的关键工序。咖啡碱是一种甲基黄嘌呤,是茶叶中含量比较丰富的生化成分之一,也是茶叶主要呈味物质和生理活性成分,具有促进兴奋、强心、解毒、利尿、助消化等功效。咖啡碱在普洱茶后发酵过程中呈增加趋势。文章对普洱茶后发酵过程中咖啡碱变化的相关研究进行系统综述,为普洱茶咖啡碱理论研究提供科学依据。     

转双抗虫基因741杨的抗虫效应及其规律研究

通过室内饲虫试验 ,应用昆虫的总死亡率、各龄期死亡率、各龄历期及发育速率、昆虫体重增长速率等指标 ,测定了转双抗虫基因 74 1杨的抗虫性。研究结果表明 ,转基因抗虫杨不同株系对昆虫的致死效应有显著差异 ;不同昆虫种类和同一昆虫幼虫的不同龄级对转基因杨株系的敏感性有明显差异 ,4种测试昆虫的敏感性强弱依次为 :杨小舟蛾 >美国白蛾 >杨扇舟蛾 >舞毒蛾 ,随着昆虫幼虫龄级的增加 ,昆虫对转基因杨株系的敏感性逐渐降低 ;高抗虫株系主要表现为对低龄幼虫的强致死作用 ,中等抗虫株系表现为对各龄幼虫稍低的但是持续的致死效应 ;各转基因杨株系对测试昆虫的生长和发育都有明显抑制作用 ,可导致昆虫的发育历期延长、发育速率和体重增长速率降低。     

苏云金杆菌cry 1C基因检测及其与杀虫活性的关系

对实验室分离保存的 5 4株苏云金芽孢杆菌的H 血清型、杀虫晶体蛋白质 ,杀虫基因cry 1C和对甜菜夜蛾的活性进行了检测 ,分析了它们之间的关系。结果表明 ,有 2 8株菌株含有cry 1C基因 ,携带有cry 1C基因的菌株的晶体蛋白质主要为 135ku左右 ,它们对甜菜夜蛾均有较高的毒性 ,这些菌株的鞭毛抗原血清型主要分布在H 5和H 7。     

藜芦杀虫活性的初步研究

先后以乙醇、氯仿和正丁醇为溶剂,提取了熊耳山区植物藜芦根茎中的活性物质。得到3个提取物:乙醇提取物、氯仿萃取物和正丁醇萃取物,产率分别为2.93%、1.14%和0.58%。测定了3种溶剂萃取物对粘虫、蚜虫、朱砂叶螨和蚊幼虫的毒杀活性。结果说明:这几种提取物都具有良好的毒杀效果。氯仿提取物对3龄粘虫有很强的拒食作用;乙醇提取物对4龄蚊幼虫的杀虫活性最高;3种溶剂萃取物对蚜虫的毒杀能力大小次序为:氯仿提取物>正丁醇提取物>乙醇提取物;对朱砂叶螨的毒杀力大小为:乙醇提取物>氯仿提取物>正丁醇提取物。采用试管反应法和层析法对藜芦根茎提取物进行化学成分预试,结果显示:乙醇提取物、氯仿提取物和正丁醇提取物中均含有生物碱类活性物质。     

生产工艺对乌龙茶中咖啡因含量的影响

目的:为研究乌龙茶生产工艺对其咖啡因含量的影响。方法:利用紫外分光光度法测定各个生产工序的安溪乌龙茶本山品种半成品中咖啡因含量。结果:安溪乌龙茶本山品种成品相对其他工序的半成品而言,咖啡因含量明显增多,比鲜叶提高了16.1%。结论:生产工艺尤其是加热对安溪乌龙茶本山品种中咖啡因含量有较大影响。     

药用植物内生菌的分离及抗菌活性的初步研究

为研究药用植物金荞麦、款冬及黄皮树中内生菌的抗菌活性,筛选具有广谱抗菌效果的内生菌。以导致人畜及植物致病的15种病原微生物为拮抗菌株,采用改进K-B纸片法、生长速率法及琼脂二倍稀释法进行抑菌试验。结果从三种药用植物中共分离到内生菌38株,其中FE-R9、TE-R7、PE-S11三株内生真菌发酵液提取物对10种人畜指示菌的最低抑菌浓度(M IC)分别在7.50~15.00 g.L-1、3.13~12.50 g.L-1、0.39~15.00 g.L-1之间。FE-R9、TE-R7、PE-S11对多种病原微生物具有显著抑制生长的作用,这可为寻找天然抗菌物质提供资源。     

荔枝果皮乙醇提取液抑菌及抗氧化作用的研究(英文)

以乙醇为溶剂的荔枝果皮提取液,用滤纸片法测定其对常见细菌、霉菌的抑菌圈大小,同时研究了不同浓度乙醇的提取液对抑制柑橘青霉的影响,并通过清除DPPH自由基、OH·试验,测定了荔枝果皮的抗氧化效果.结果表明:荔枝果皮的95%乙醇提取液对大肠杆菌、变形杆菌、柑橘青霉均有不同程度的抑制作用,抑菌圈在8.6～18.7 mm之间.其中,柑橘青霉对95%乙醇提取浓度、含量5 mg/mL的荔枝果皮最为敏感,抑菌圈为18.7 mm.不同含量(2.5、5、10、20、40mg/mL)的荔枝果皮提取液DPPH自由基清除率在90%左右,而OH·清除率分别为1.7%、12.9%.78.6%、97.5%和100%.     

春兰内生真菌的分离及其抑菌活性的初步研究

采用平板分离法从皖西大别山野生兰花的根、茎、叶中分离内生真菌32株,用琼脂块法对获取的菌株进行抑菌活性筛选,其中有4种兰花内生真菌对供试菌株有抑菌作用,占总分离菌株的12.50%,对抑菌活性较强的一株内生真菌进行形态学鉴定,结果表明它属于无孢类群。     

丘陵地区茶树生态的研究

茶树[Camellia sinensis(L,) KuntZe]具有喜温、喜湿、喜酸性土和耐荫的特性。生育环境不良,茶叶产量和品质均差。因此,如何     

具抑菌活性海洋微生物的筛选

从上海郊区海域采集的海水、海泥样中分离出193株海洋细菌,对其进行抑菌活性菌株的筛选。对分离出的菌株分别利用琼脂块法和管碟法进行初筛和复筛,结果显示有29株海洋细菌具有抑菌活性,占总分离菌株的15%,其中抑菌能力较强的G4抑菌谱较广,同时能抑制革兰氏阳性和阴性指示菌。     

不同生长期茶树对土壤中铅的吸收及体内运移特性研究

选取江苏省宜兴市阳羡茶场的新、老两个茶园进行实地试验,分析了幼年期和成年期茶树各部位中铅含量的差异,以及茶树各部位铅含量与土壤铅含量的相关性;同时通过向茶园土壤进行投加铅处理后,分析土壤Pb污染条件下茶树吸收铅的特性以及不同生长期茶树对土壤中铅的富集和运移规律。结果表明,铅在茶树各部位含量分布的一般趋势为：侧茎>老叶>主茎>侧根>主根>嫩叶,侧茎比茶树其余部位中的铅含量高出3倍以上;对于不同生长期的茶树而言,幼年期茶树嫩叶的铅含量较成年期茶树嫩叶的高。同时茶树各部位铅含量与土壤铅含量的相关性分析的结果表明,茶树根与土壤中的铅含量相关性最为显著,其次为叶,再次为茎。当土壤受到铅污染后,茶树各部位的铅含量均有所增加,其中侧根和主根中铅的增加量最为明显;随着土壤铅污染时间的延续,茶树各部位中的铅逐渐向侧茎集聚,使侧茎的含铅量在茶树各地上部分中居于最高水平。