甲醇酵母基因表达系统的研究进展

在大肠杆菌这一传统表达系统被频繁用作研究各种基因表达时,一种新型且有效的基因表达系统--甲醇酵母正逐渐引起人们的注意。此系统不仅具有高表达、高稳定、高分泌的特点,而且其宿主甲醇酵母--巴斯德毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）具有高密度生长的特性。因此近年来此表达系统的研究得到迅速发展,在其中表达了多种具有商业价值的外源蛋白。本文对甲醇酵母基因表达系统的特点及研究进展作一简要综述。     

人胰岛素原在甲醇酵母（Pichia pastoris）中的高效表达

甲醇营养型酵母Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ在近十几年已被人们广泛用作外源基因表达的系统。表达的是可溶性蛋白,且胞外分泌。本研究系将外源基因（胰岛素原基因）连接到穿梭质粒ＰＨＩＬ－Ｓ１上,再通过同源重组到酵母染色体,筛选表达株。用１升发酵罐在甲醇诱导下可获得０．３ｇ／Ｌ胰岛素原的产率。     

人胰岛素原在甲醇酵母(Pichia pastoris)中的高效表达

甲醇营养型酵母Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ在近十几年已被人们广泛用作外源基因表达的系统。表达的是可溶性蛋白,且胞外分泌。本研究系将外源基因（胰岛素原基因）连接到穿梭质粒ＰＨＩＬ－Ｓ１上,再通过同源重组到酵母染色体,筛选表达株。用１ 升发酵罐在甲醇诱导下可获得０．３ｇ／Ｌ胰岛素原的产率。     

毕赤氏酵母P_(AOX2)突变体序列分析

近年来巴斯德毕赤氏酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）已被广泛用于商业化生产外源蛋白的基因工程菌［１］。与常用的酿酒酵母表达系统相比,该系统具有以下优点：１有强有力的、受甲醇严格诱导调控的启动子;２表达蛋白高分泌;３表达菌株稳定;４适合于高密度培养。但目前使用的系统也有其不足之处,当利用该系统的载体将外源基因通过双交换整合到染色体中ＡＯＸ１基因位置时,ＡＯＸ１基因被破坏［２］。已知醇氧化酶是细胞利用甲醇的关键酶,该酶分别由ＡＯＸ１基因和ＡＯＸ２基因编码合成［３］。虽然ＡＯＸ２与ＡＯＸ１的…     

巴斯德毕赤酵母表达系统优化策略

巴斯德毕赤酵母 (Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ,Ｐｐ)表达系统是目前分子生物学领域中用于表达重组蛋白的标准工具之一。Ｐｐ的如下优点是促成此表达系统在近十几年里迅速发展和被广泛应用的重要原因 :Ｐｐ为单细胞真核生物 ,生长快 ,易于分子遗传学操作 ;Ｐｐ的醇氧化酶 1 (ＡｌｃｏｈｏｌＯｘｉｄａｓｅ 1 ,ＡＯＸ 1 )基因的启动子具有强诱导性和强启动性 ,适于外源基因的高水平诱导表达 ;Ｐｐ具有强烈的好氧生长偏爱性 ,可进行细胞高密度培养 ,利于大规模工业化生产 ;Ｐｐ可高水平分泌表达外源蛋白 ,纯化方便 ;Ｐｐ具有真核细胞的翻译后…     

甲醇酵母表达体系

甲醇酵母表达体系柴清黄秉仁（中国医学科学院基础研究所、中国协和医科大学基础医学院,北京１００００５）关键词巴氏毕赤酵母醇氧化酶表达体系甲醇酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）是最近迅速发展的一种表达宿主,它有许多优点：（１）含特有的ＡＯＸ（醇氧化酶基...     

P.pastoris高效表达外源蛋白的研究进展

Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ表达系统具有原核细胞和哺乳类细胞表达系统的特点,已广泛地应用于表达外源基因。为获得高质量外源蛋白的表达而进行了大量研究并取得了许多进展,如构建并筛选多拷贝的由ＡＯＸ启动的表达盒,优化培液组分,减少蛋白降解,分泌蛋白的纯化和Ｎ－连接寡糖链的特点。     

人血小板生成素全长分子在酵母系统中的分泌表达及活性分析

外源基因可通过整合型载体被整合到毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）染色体上,获得遗传性稳定分泌表达株．利用酵母信号肽ＭＦα,对该信号肽蛋白酶识别位点的相关序列进行重新设计,使天然人ＴＰＯ成熟肽在毕赤酵母系统中分泌表达成功．表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ进行分析,分子量约为６６ｋＤ处蛋白条带可被ＴＰＯ抗体识别;表达量约为０．１ｇ／Ｌ;Ｎ端氨基酸序列分析结果与设计的一致;表达产物对小鼠骨髓细胞形成巨核细胞集落形成单位（ｍｅｇａｋａｒｙ－ｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ,ＣＦＵ－Ｍｅｇ）具有明显的刺激作用．     

P.pastoris高效表达外源蛋白的研究进展

Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ表达系统具有原核细胞和哺乳类细胞表达系统特点,已广地应用于表达外源基因。为获得高质量外泊蛋白的表达而进行了大量研究并取得了许多进展,如构建并筛选多拷贝的由ＡＯＸ启动的表达盒,优化培液组分,减少蛋白降低,分泌蛋白的纯化和Ｎ－连接寡糖链的特点。     

重组人血清白蛋白在Pichia pastoris中分泌表达影响因素的研究

为获得高产稳产重组人血清白蛋白的Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ细胞株用于高密度发酵,构建了多种分泌表达载体,在Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ中作表达,研究表达载体构建等因素对表达量的影响。发现采用酿酒酵母α性成熟因子前导肽比人血清白蛋白天然前导肽作为分泌信号肽的表达量要高１０％左右。而载体整合方式、整合拷贝数、５’非翻译区的改造和甲醇利用表型等对表达量无规律性影响。筛选到的高表达株经高密度发酵,细