核酸杂交技术在环境微生物检测中的应用

核酸杂交技术在环境微生物检测中的应用胡稳奇,张志光（湖南师范大学生物系,长沙４１０００６）核酸分子杂交技术是７０年代发展起来的一种崭新的分子生物学技术,即根据ＤＮＡ分子碱基互补配对的原理,以一特异性的ｃＤＮＡ探针与待测样品的ＤＮＡ或ＲＮＡ形成杂交分子...     

广泛用于基因表达调控研究中的LacZ基因

ＬａｃＺ基因是大肠杆菌乳糖操纵子中的一个基因,１９６９年,美国哈佛大学以Ｂｅｃｋｗｉｔｈ博士为首的研究小组,应用ＤＮＡ分子杂交技术首次分离到该基因。ＬａｃＺ基因编码的ｂｅｔａ－半乳糖苷酶（简称ｂｅｔａ－ｇａｌ）是由４个亚基组成的四聚体,可催化乳糖的水...     

关于植物随机引物扩增多态性DNA标记的可靠性问题

随机扩增多态性ＤＮＡ（ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ,ＲＡＰＤ）技术是由Ｗｉｌｌｉａｍｓ等［１］首先创立的一种ＤＮＡ分子标记技术。由于ＲＡＰＤ技术具有快速、简便、通用性好,对ＤＮＡ的需求量小,质量要求低等优点,一经问世,就受到了广泛的注意,并被成功地用于动物、植物、人和微生物的遗传多样性检测、基因定位、品系鉴定、医学诊断、遗传图谱构建和系统学研究等。在ＲＡＰＤ分子标记的应用研究过程中,人们得出了两种截然不同的结论：一部分人认为ＲＡＰＤ标记的遗传符合孟德尔分离规律,稳定…     

高等植物DNA重复序列的主要类型和特点

高等植物核基因组的一个显著特征是其内含有大量的ＤＮＡ重复序列,因此它们在核基因组结构和功能研究中居于举足轻重的地位。一些ＤＮＡ重复序列已日趋广泛地作为分子民用于构建遗传图谱、鉴别品种、研究进化和分离目标基因等。主要介绍高等植物几类重要ＤＮＡ重复序列,如卫星ＤＮＡ、微卫星ＤＮＡ、核糖体ＲＮＡ基因、端粒重复序列和转座子等的若干特点和用途。     

分子生态学研究进展

介绍了这个新学科的基本内容,其特征是ＤＮＡ标记的应用。结合我国最近几年动植物自然种群的分子研究,介绍国际分子生态学各个领域的进展：①分子生态学的技术;②分子种群生物学;③分子环境遗传学;④分子适应。实验结果显示：只要方法灵敏,ＤＮＡ具有最高水平的多样性。即使是原先认为遗传变异很少的大熊猫和野生大豆,使用灵敏的方法,也能证实生物个体遗传组成的唯一性。种群内ＤＮＡ的高度多态性,不同景观生态类型种群之间低水平遗传分化,说明自然种群绝大多数多态ＤＮＡ位点是中性、近中性突变。至今没有发现盐渍条件下植物个体耐盐性水平与多态ＤＮＡ有相关性,更证实这一点。发现少数多态ＤＮＡ位点与形态分化有关或呈明显的地理梯度,暗示其适应意义。自然种群这两种生态学功能不同的多态ＤＮＡ的存在,说明有必要重新讨论遗传多样性研究和保存中的取样策略。分子遗传研究也指导生态系统和物种的保育。文章最后从分子生物学的方法论和已经阐明的生态过程的众多分子信息提出分子生态学的新思路。建议分解生态系统,找出一个或少数物种和环境构成生态系统的基本功能单位,研究所涉及的基因及基因对基因的相互作用。进一步提议首先分析最简单的生态系统里发生的专一过程的分子细节。     

DNA水平上的植物系统学研究进展

分子钟假说为在分子水平上研究生物进化提供了理论基础,分子系统学已成为当前生物学领域中的热门课题,并取得了许多引人注目的进展。本方要以高等植物为对象,从核ＤＮＡ,叶绿体ＤＮＡ和线粒体ＤＮＡ三方面对植物分子系统学进行了综述。     

鸡胚骨骼肌组织M-CAT结合因子的初步鉴定

采用偶联ＣＡＴＴＧＣＴ寡核苷酸的ＤＮＡ亲和层析柱从发育１３ｄ鸡胚骨骼肌核抽提物中分离到两种核蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明,被ＤＮＡ亲和柱滞留的两种核蛋白分子量分别为３０ｋＤ和３２ｋＤ．凝胶阻滞结合竞争分析显示,纯化的核蛋白可与Ｍ－ＣＡＴ共有序列ＣＡＴＴＣＣＴ特异结合．Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术确定仅３０ｋＤ分子可直接识别、结合ＣＡＴＴＣＣＴ元件,但３２ｋＤ分子却不能．结果提示,３０ｋＤ分子为依赖ＤＮＡ的Ｍ－ＣＡＴ结合因子,３２ｋＤ分子属性有待进一步研究证实     

手性环方铂络合物与DNA相互作用中的分子识别

用生物微量热技术及ＤＮＡＴｍ测量研究了手性不同的三种环方铂络合物与小牛胸腺ＤＮＡ（２００ｂｐ）作用中的特异性,发现Ｒ,Ｒ构型的与ＤＮＡ作用最强,这与癌细胞的体外筛选结果相一致．而且通过ＨＰＬＣ及１３Ｃ－ＮＭＲ研究为环方铂络合物与ＤＮＡ作用的分子机理分析找到了直接的证据．     

分子标记技术及其发展

认识到生物个体之间ＤＮＡ序列差异并以此作为标记的分子标记技术的研究始于1 980年 ,之后随着分子生物学技术的发展 ,ＤＮＡ分子标记技术也得到迅速发展 ,现在ＤＮＡ标记技术已有数十种 ,它们被广泛应用于作物遗传育种、基因组作图、基因定位、植物亲缘关系鉴别、基因库构建、基因克隆等方面。本文仅就几类主要分子标记技术作一简单介绍。1 .基于分子杂交技术的分子标记技术1 .1　限制性片段长度多态性 (ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇ ｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ,ＲＦＬＰ)　　ＲＦＬＰ是研究最早的分子标记技术 ,1 …     

DNA分子标记在柑桔中的应用

ＤＮＡ分子标记是最为理想的遗传标记 ,依其多态性检出所用的分子生物学技术 ,大致可分为Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交技术为核心的分子标记和ＰＣＲ技术为核心的分子标记。前者的代表性技术有ＲＥＬＰ(ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ)和ＤＮＡ指纹技术 (ＤＮＡｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ)。后者的代表性技术有ＲＡＰＤ(ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ)、ＳＣＡＲ(ｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃ ｔｅｒｉｓｔｉｃａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｇｉｏｎ)…     

在植物粗线期染色体和DNA纤维上的荧光原位杂交技术

介绍了两种荧光原位杂交技术的详细实验步骤。第一种技术是在减数分裂粗线期染色体上的荧光原位杂交,包括从花粉母细胞中制备粗线期染色体和在这种染色体上定位ＤＮＡ序列,其分辨率水平能够达到１００ｋｂ。第二种技术是从植物细胞核中制备ＤＮＡ纤维,并在上面进行原位杂交,能够直接分析ＤＮＡ序列的分子排列关系,其分辨率水平能达到几个ｋｂ。为了说明这两种原位杂交技术在研究基因组和染色体结构、构建高分辨率的ＤＮＡ物理图谱上的能力,将展示用该技术直接分析番茄染色体端粒重复序列和端粒联接重复序列的染色体定位和ＤＮＡ分子排列。     

激光育种机理的动力学研究

对ＤＮＡ分子系统的动力学研究表明,ＤＮＡ分子系统存在双稳势。激光与ＤＮＡ作用,可激发ＤＮＡ分子系统进入混沌状态,从而引起遗传变异。若无激光作用,生物体系是一个稳定体系。     

17个新的C2H2型锌指基因片段的分离与克隆

按照Ｃ２Ｈ２型锌指基因保守结构域的ＤＮＡ序列设计一对简并引物,以人基因组ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ同源扩增,将由此获得的锌指基因片段为探针,从人胎肾、骨骼肌、骨骼组织的ｃＤＮＡ分子库中筛选到２２个Ｃ２Ｈ２型锌指蛋白ｃＤＮＡ片段,经国际ＮＣＢＩ数据库查询检索,其中１７个为新的锌指基因片段。对从胎肾ｃＤＮＡ分子库中分离到的Ｋ３－４和Ｋ５－１２克隆进行了表达谱分析,发现Ｋ３－４在肾脏中的表达量明显高于其他几     

DNA与人类起源和演化──现代分子生物学技术在人类学研究中的应用

ＤＮＡ与人类起源和演化──现代分子生物学技术在人类学研究中的应用刘武,叶健（中国科学院古脊椎动物与古人类研究所）（公安部第二研究所分子遗传室）１９８７年１月,美国加州大学伯克利分校的分子生物学家Ｃａｎｎ、Ｓｔｏｎｅｋｉｎｇ和Ｗｉｌｓｏｎ３人联合在英国...     

金黄色葡萄球菌稳定L型DNA的提取及酶切

本文从一例恶性淋巴瘤合并金黄色葡萄球菌Ｌ型败血症患者的骨髓内分离得到金黄色葡萄球菌稳定Ｌ型,用玻璃微珠机械研磨方法提取ＤＮＡ,纯化后被ＥＣＯＲＩ酶切,酶切ＤＮＡ片段可用于核酸杂交等分子物生学研究。     

DNA标记和分子育种

ＤＮＡ标记和分子育种钱惠荣郑康乐（中国水稻研究所生物工程系杭州３１０００６）生物技术的发展给作物遗传育种研究带来了巨大的变化,ＤＮＡ分子标记技术的应用是其中最显著的变化之一［９,４８］。由于分子标记相对于经典遗传育种研究中的形态性状具有无可比拟的优越性,它的使用也越来越广泛。许多以前无法进行的研究,比如环境因素的影响,数量性状的多重效应等等,在分子标记的帮助下已经开展。同时分子标记直接应用于...     

RAPD分子标记及其在作物遗传育种中的应用

ＲＡＰＤ分子标记是一种新型的分了遗传标记,其原理是采用１０个碱基的随机引物,以基因组ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ随机扩增。其优越性在于其方法简单;分析中的花费少,用时短;分析所需的ＤＮＡ用量也不多等。本文着重介绍以电泳技术和ＰＣＲ扩增技术为核心的分子标记以及在农作物遗传育种中的应用。     

分子生物学手段在植物系统与进化研究中的应用

在植物系统与进化研究中,为了揭示真实本质,必须从分子水平进行研究。植物分子系统学的研究包括两大方面,一是蛋白质酶,二是核酸。酶电泳是分子水平上研究植物分子遗传学最经济有效的方法,可以有效地揭示自然居群中遗传结构、基因流动、变化系统、选择作用和系统发育等问题。植物核酸系统学的研究倍受青睐,因为核酸分子量基本的进化单元,几乎不受主观因素影响。相关的核酸分析技术主要有：ＤＮＡ杂交ＤＮＡ限制酶谱分析、ＲＦ     

RACE: cDNA末端快速扩增技术进展

ＲＡＣＥ：ｃＤＮＡ末端快速扩增技术进展明洪黄秉仁中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所国家分子生物学重点实验室北京１００００５基因表达水平和模式的变化驱动着生物体内主要的生物学过程。分离和克隆基因是研究基因结构、功能以及表达的基础。以往建立和筛选ｃＤＮＡ和ＤＮＡ文库来分离克隆目的基因的经典方法繁琐而且工作量大。ＰＣＲ技术的出现极大地提高了分离克隆目的基因的效率。反向ＰＣＲ、锅...     

分子标记技术在林木常规育种中的应用及其问题

分子生物学技术在植物和动物常规育种中的应用主要包括两个方面,即分子标记和基因工程。分子标记,或称ＤＮＡ标记,是基因型在ＤＮＡ水平上的表现形式。目前,已产生了多种分子标记技术,在方法上可以分为三类［１７］：（１）非ＰＣＲ类,如ＲＦＬＰ（Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）和ＶＮＴＲｓ（Ｖａｒｉａｂｌｅｎｕｍｂｅｒｏｆｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔｓ）。（２）以...