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毛冠鹿大脑组织全长cDNA文库构建
引用本文:汤文文,张文,曹祥荣,张锡然,徐春茂,王强,胡均.毛冠鹿大脑组织全长cDNA文库构建[J].动物学杂志,2006,41(1):53-59.
作者姓名:汤文文  张文  曹祥荣  张锡然  徐春茂  王强  胡均
作者单位:1. 南京师范大学生命科学学院,南京,210097
2. 安徽省皖南野生动物救护中心,休宁,245400
3. 四川省成都动物园,成都,610081
基金项目:国家自然科学基金(No.30370789),江苏省教委自然科学基金(No.02KJD180006)
摘    要:运用SMART技术构建了毛冠鹿(Elaphodus cephalophus)大脑组织全长cDNA文库。提取大脑组织总RNA,Oligotex mRNA Kit纯化、获得poly(A) RNA,以CDSⅢ/3′PCR引物进行逆转录,LD-PCR扩增获得全长双链cDNA,经SfiⅠ酶切及柱层析分离后,500 bp以上的片段与载体λTripIEx2连接,体外包装得到cDNA文库。经鉴定原始文库滴度为5.1×105pfu/ml,扩增后文库滴度为1.5×109pfu/ml,重组率达到85%以上,插入片断平均长度约为1.0 kb,说明构建文库质量符合要求,可用于大脑特异表达基因的筛选。从该文库中克隆到了rig基因全长,包含5′和3′非编码区,从第43至477个核苷酸为一完整阅读框(ORF),此阅读框可编码一个145氨基酸的rig蛋白。

关 键 词:毛冠鹿  大脑  cDNA文库  SMART技术
文章编号:0250-3263(2006)01-53-07
收稿时间:2005-06-01
修稿时间:2005-06-012005-09-09

Construction of the cDNA Library from Cerebrum of Tufted Deer
TANG Wen-Wen,ZHANG Wen,CAO Xiang-Rong,ZHANG Xi-Ran,XU Chun-Mao,WANG Qiang,HU Jun.Construction of the cDNA Library from Cerebrum of Tufted Deer[J].Chinese Journal of Zoology,2006,41(1):53-59.
Authors:TANG Wen-Wen  ZHANG Wen  CAO Xiang-Rong  ZHANG Xi-Ran  XU Chun-Mao  WANG Qiang  HU Jun
Abstract:
Keywords:Elaphodus cephalophus  Cerebrum  cDNA library  SMART
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