| 牛αS1-酪蛋白5'调控序列驱动人α-LA基因与LacZ基因在牛乳腺上皮细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 张莉,李庆章,陈建晖,高学军,田雷.牛αS1-酪蛋白5''调控序列驱动人α-LA基因与LacZ基因在牛乳腺上皮细胞中的表达[J].生物化学与生物物理进展,2008,35(12). |
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| 作者姓名： | 张莉 李庆章 陈建晖 高学军 田雷 |
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| 作者单位： | 东北农业大学乳品科学教育部重点实验室,哈尔滨,150030 |
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| 基金项目： | 黑龙江省科学技术计划 |
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| 摘 要： | 将牛αS1-酪蛋白5′调控序列约1.2 kb的片段,连接到含SV40启动子调控下β-半乳糖苷酶基因(LaeZ)的PSV载体上,做为肩动子,在其后连接0.76kb的人仅α-乳白蛋白基凼(α-LA),构建真核表达载体αS1-LA-psv.采用组织块接种法,培养奶牛乳腺上皮细胞,经传代纯化后,对细胞接种存活率、群体倍增时间、生长曲线、形态学等生物学性状进行检测,用免疫荧光细胞染色法对培养的奶牛乳腺上皮细胞进行角蛋白18鉴定,结果表明,成功建立奶牛乳腺上皮细胞系,细胞传至20代以上时仍保持旺盛的增殖活力.将构建的真核表达载体αS1-LA-psv转染奶牛乳腺上皮细胞,培养24～120h均检测到了β-半乳糖苷酶的表达;培养72 h检测到细胞中人α-乳白蛋白的表达,表达量约为0.64 g/L.实验结果表明,建它的奶牛乳腺上皮细胞系具有外源基因表达活性,得到的牛αS1-酪蛋白5′调控序列能作为启动子指导外源基因的表达,构建的真核表达载体能在体外培养的牛乳腺上皮细胞中同时表达人α-乳白蛋白和β-半乳糖苷酶.
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| 关 键 词： | 人α-乳白蛋白基因 β-半乳糖苷酶基因 奶牛乳腺上皮细胞 基因表达 |
Expression of LacZ and Human α-LA Regulated by 5' Flanking Sequence of Bovine αS1 Casein in Bovine Mammary Epithelial Cells |
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| ZHANG Li,LI Qing-Zhang,CHEN Jian-Hui,GAO Xue-Jun,TIAN Lei.Expression of LacZ and Human α-LA Regulated by 5'' Flanking Sequence of Bovine αS1 Casein in Bovine Mammary Epithelial Cells[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2008,35(12). |
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| Authors: | ZHANG Li LI Qing-Zhang CHEN Jian-Hui GAO Xue-Jun TIAN Lei |
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