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凝集素芯片技术检测糖蛋白方法的建立及初步应用
引用本文:简强,于汉杰,陈超,李铮.凝集素芯片技术检测糖蛋白方法的建立及初步应用[J].生物化学与生物物理进展,2009,36(2):254-259.
作者姓名:简强  于汉杰  陈超  李铮
作者单位:西北人学牛命科学学院,国家微检测系统工程技术研究中心,西安,710069
基金项目:国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2007AA02Z413).
摘    要:建立了凝集素芯片技术检测糖蛋白的方法,对实验条件进行了优化,应用凝集素芯片初步检测分析了Chang?蒺s liver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白糖链构成.将凝集素ConA、GNA固定于环氧化修饰的玻片表面,用Cy3标记标准糖蛋白RNaseB,利用凝集素识别特异糖链的原理建立凝集素芯片检测糖蛋白的方法.摸索出最佳封闭剂是含1% BSA的磷酸缓冲液,最佳孵育时间及温度为3 h和室温,最佳孵育缓冲液为含1% BSA和0.05% Tween-20的磷酸缓冲液,并用甘露糖抑制实验验证了凝集素芯片结合的特异性.用包含10种凝集素的芯片,成功解析了标准糖蛋白RNaseB、Fetuin的糖链构成,证实了凝集素芯片检测糖蛋白糖链的可行性.最后用凝集素芯片初步检测分析了Chang?蒺s liver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白糖链构成,发现 Chang's liver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白可能有多价 Sia或GlcNAc、terminalα-1,3 mannose、GalNAc、Galβ-1,4GlcNAc这些糖链结构的存在.蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,它在微生物感染、细胞分化、肿瘤转移、细胞癌变等生命活动中起着重要作用,因此近年来蛋白质的糖基化研究受到广泛的重视,但由于缺乏一种简便、快速、高通量的检测手段,蛋白质糖基化修饰的研究发展缓慢.凝集素芯片技术的出现实现了对糖蛋白的快速、准确、高通量的检测 分析.

关 键 词:凝集素芯片  糖基化修饰  糖蛋白  糖组学  肝细胞
收稿时间:2008/5/26 0:00:00
修稿时间:2008/7/11 0:00:00

Establishment of a Lectin Microarray Method for The Rapid Analysis of Glycoprotein and Its Application
JIAN Qiang,YU Han-Jie,CHEN Chao and LI Zheng.Establishment of a Lectin Microarray Method for The Rapid Analysis of Glycoprotein and Its Application[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2009,36(2):254-259.
Authors:JIAN Qiang  YU Han-Jie  CHEN Chao and LI Zheng
Affiliation:College of Life Sciences, Northernwet University, National Engineering Research Center For Miniaturized Detection System, Xi'an 710069, China;College of Life Sciences, Northernwet University, National Engineering Research Center For Miniaturized Detection System, Xi'an 710069, China;College of Life Sciences, Northernwet University, National Engineering Research Center For Miniaturized Detection System, Xi'an 710069, China;College of Life Sciences, Northernwet University, National Engineering Research Center For Miniaturized Detection System, Xi'an 710069, China
Abstract:
Keywords:lectin microarrays  glycosylation  glycoprotein  glycomics  hepatic cell
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