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利用移码突变和终止密码子提高下游目的基因的表达水平
引用本文:陈斌,李建彬,米志强,安小平,李存,刘大斌,姜焕焕,王娟,黄芬,张宝中,范华昊,何后军,童贻刚.利用移码突变和终止密码子提高下游目的基因的表达水平[J].中国生物工程杂志,2011,31(8):92-96.
作者姓名:陈斌  李建彬  米志强  安小平  李存  刘大斌  姜焕焕  王娟  黄芬  张宝中  范华昊  何后军  童贻刚
作者单位:1. 江西农业大学动物科学技术学院 南昌 330045; 2. 军事医学科学院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全国家重点实验室 北京 100071; 3. 华南农业大学食品学院 广州 510642
基金项目:国家自然科学基金,"十一五"国家科技重大专项
摘    要:目的:在基因结构复杂的慢病毒载体插入报告基因并提高目的基因表达量。方法:慢病毒载体上有复杂的基因排列,为了不影响慢病毒载体的活性,必须尽量保留原有的基因,替换不必要的基因。首先将报告基因萤光素酶插入慢病毒载体替换基因Env后,结果检测不到报告基因的表达。为了提高报告基因的表达水平,将报告基因的读码框向后移动一个碱基,同时在其上游增加一个终止密码子,然后检测报告基因的表达水平。结果:通过移动报告基因的读码框同时在上游增加终止密码子,使报告基因的表达水平大大提高。结论:在构建基因表达载体时,通过改变目的基因与上游起始密码子ATG之间的相对位置以及增加终止密码子,可以大幅提高目的基因的表达水平。

关 键 词:慢病毒载体  报告基因  基因表达  定点突变  
收稿时间:2011-02-03
修稿时间:2011-05-30

Improving Gene Expression by Introducing Upstream Frameshift and Stop Codon
CHEN Bin,LI Jian-bin,MI Zhi-giang,AN Xiao-ping,LI Cun,LIU Da-bin,JIANG Huan-huan,WANG Juan,HUANG Fen,ZHANG Bao-zhong,FAN Hua-hao,HE Hou-jun,TONG Yi-gang.Improving Gene Expression by Introducing Upstream Frameshift and Stop Codon[J].China Biotechnology,2011,31(8):92-96.
Authors:CHEN Bin  LI Jian-bin  MI Zhi-giang  AN Xiao-ping  LI Cun  LIU Da-bin  JIANG Huan-huan  WANG Juan  HUANG Fen  ZHANG Bao-zhong  FAN Hua-hao  HE Hou-jun  TONG Yi-gang
Affiliation:CHEN Bin1,2 LI Jian-bin2,3 MI Zhi-qiang2 AN Xiao-ping2 LI Cun2 LIU Da-bin2 JIANG Huan-huan2 WANG Juan2 HUANG Fen2 ZHANG Bao-zhong2 FAN Hua-hao2 HE Hou-jun1 TONG Yi-gang2(1 College of Animal Science & Technology,Jiangxi Agricultural University,Nanchang 330045,China)(2 State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity,Institute of Microbiology and Epidemiology,Academy of Military Medical Science,Beijing 100071,China)(3 College of Food Science,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China)
Abstract:Objectives:To improve the expression of gene of interest in a lentiviral vector with complicated gene distribution.Methods:Lentiviruses have complicated gene distributions such as overlapping Env,Rre,Rev and Tat on their genomes.To avoid damaging the reproduction efficiency of these vectors,it is better to retain as much as possible the original gene structure when replacing the unwanted Env gene with a gene of interest.A reporter gene luc was first inserted into the lentiviral vector in place of the Env ge...
Keywords:Lentiviral vector Reporter gene Gene expression Site-directed mutation  
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