| Asia-Ⅰ口蹄疫病毒P1-2A基因真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验术 |
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| 引用本文： | 牟伟锋,金宁一,鲁承,霍晓伟,胡博,屈勇刚,常巧呈,于长勇,颜雯,丛艳昭,曹世诺.Asia-Ⅰ口蹄疫病毒P1-2A基因真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验术[J].中国生物工程杂志,2008,28(8). |
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| 作者姓名： | 牟伟锋 金宁一 鲁承 霍晓伟 胡博 屈勇刚 常巧呈 于长勇 颜雯 丛艳昭 曹世诺 |
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| 作者单位： | [1]军事医学科学院军事兽医研究所基因工程实验室,长春130062 [2]延边大学农学院动物医学系,龙井133400 [3]吉林农业大学,长春130118 |
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| 摘 要： | 目的：构建含有Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒（FMDV）衣壳蛋白前体P1-2A基因的真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A，并用pVAXⅠ-P1-2A免疫小鼠，评价其体液免疫和细胞免疫水平。方法：通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDV P1-2A编码区的目的基因，并将其克隆到pMD18-T载体上。将pMD18-T-P1-2A和pVAXⅠ分别经EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切后连接构建真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A。将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测。再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验。结果：酶切结果与预期目的条带大小相符；荧光结果表明经pVAXⅠ-P1-2A转染的细胞有明显的黄绿色荧光，说明P1-2A基因在HeLa细胞中得到了表达；小鼠免疫结果表明，免疫的小鼠都产生了较强的体液免疫和细胞免疫，并且T淋巴细胞增殖数和产生IFN-γ的细胞数和对照组相比显著提高（P〈0．05）。间接ELISA试验表明，在免疫第14天抗体水平比对照组明显增高（P〈0．05）。结论：成功构建了真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A，并通过小鼠免疫试验发现重组质粒试验组能够诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疾应答。
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| 关 键 词： | FMDV Asia Ⅰ P1-2A基因 真核表达免疫应答 |
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