| 小菜蛾U6 snRNA基因的克隆及作为miRNA定量表达分析内参基因的评价 |
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| 引用本文： | 封冰,梁沛,高希武.小菜蛾U6 snRNA基因的克隆及作为miRNA定量表达分析内参基因的评价[J].昆虫学报,2014,57(3):286-292. |
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| 作者姓名： | 封冰 梁沛 高希武 |
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| 作者单位： | （中国农业大学昆虫学系，北京 100193） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31171873,31371956);公益性(农业)行业科研专项课题(201103021) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆小菜蛾Plutella xylostella (L.)小分子非编码RNA U6的cDNA序列，并评价其是否适合作为定量检测小菜蛾microRNA (miRNA)表达量的内参基因。【方法】本研究采用RT-PCR 克隆获得了小菜蛾4龄幼虫核小RNA(small nuclear RNA, snRNA) U6的cDNA序列，并用定量PCR法检测了U6及8种miRNAs在小菜蛾不同发育阶段及不同杀虫药剂处理后的表达稳定性。【结果】小菜蛾U6的cDNA序列全长 94 bp，与其他昆虫U6的核苷酸序列一致性达98.9%。用geNorm和RefFinder软件分析荧光定量PCR结果表明，U6在小菜蛾卵、1-4龄幼虫、蛹和成虫7个不同发育阶段表达稳定；用马拉硫磷、毒死蜱、辛硫磷、灭多威、呋喃虫酰肼、高效氯氰菊酯、氯虫苯甲酰胺、溴虫腈和Bt 9种不同作用机理的杀虫药剂处理3龄末幼虫48 h，对U6的表达水平无显著影响。【结论】小菜蛾U6表达水平不受不同发育阶段和不同杀虫药剂处理的影响，符合作为内参基因的基本特点，可作为定量PCR法评价小菜蛾miRNA或其他非编码小分子RNA表达水平的内参基因。研究结果为小菜蛾miRNA表达水平的准确定量奠定了基础。
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| 关 键 词： | 小菜蛾 U6 snRNA 定量PCR 内参基因 杀虫剂 miRNA |
Cloning and evaluation of U6 snRNA gene as a reference gene for miRNA quantification in Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae) |
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| FENG Bing,LIANG Pei,GAO Xi-Wu.Cloning and evaluation of U6 snRNA gene as a reference gene for miRNA quantification in Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae)[J].Acta Entomologica Sinica,2014,57(3):286-292. |
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| Authors: | FENG Bing LIANG Pei GAO Xi-Wu |
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| Affiliation: | (Department of Entomology, China Agricultural University, Beijing 100193, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Plutella xylostella" target="_blank">Plutella xylostella')" href="#">Plutella xylostella U6 snRNA quantitative RT-PCR reference gene insecticide miRNA |
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