杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与功能分析

中国生物工程杂志

研究报告

杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与功能分析

李杰贾岩龙闫红霞潘卫东薛乐勋

郑州大学医学实验中心郑州大学医学实验中心郑州大学医学实验中心郑州大学医学实验中心郑州大学医学实验中心

Cloning and characterization of 5′flanking region of nitrate reductase gene derived from Dunaliella Salina

全文: PDF HTML

摘要： 目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶（NR）基因5′上游序列序列,并对其功能进行分析。方法: 利用BamHI、EcoRI、HindIII、PstI、SalI、Xbal 6种限制性内切酶分别酶切盐藻基因组DNA，并与接头连接，构建成盐藻基因组步行文库。采用 LA-PCR方法，从上述盐藻步行基因组文库中扩增NR基因5′上游序列序列，测序并进行分析。为检测其表达特性,构建了该片段与GUS 嵌合基因的表达载体pNR-GUS, 通过电击法将所构建的重组表达载体转化盐藻，组织化学染色法观察GUS的表达。结果: 从盐藻基因组步行文库中扩增出约1200bp特异片段，序列分析表明5′上游序列含有启动子的特征性序列。GUS瞬时表达染色结果显示,该DNA 片段具有硝酸盐诱导和铵抑制的启动子活性。结论：所克隆的盐藻的5′上游序列可能是一种具有"开关"活性的可控性启动子。

关键词： 5′侧翼区; 功能; 杜氏盐藻; 硝酸盐还原酶基因

Abstract: Aim: Clone and characterize of the 5′- flanking region of the nitrate reductase (NR) gene derived from Dunaliella salina(D. salina ). Methods : The genomic DNA from D. salina was respectively digested with BamH I, EcoR I, Hind III, Pst I, Sal I and Xba I. A genomic walking cassette was ligated to the ends of the digested DNA fragments, and then genomic walking libraries comprising BL, EL, HL, PL, SL and XL were constructed. The 5′- flanking region of the NR gene from genomic walking libraries of D. salina was amplified by LA-PCR. The DNA sequences were analyzed with the software - Promoter Predictions. Isolated 5'-flanking regions fused to the GUS gene were tested for transient expression in the alga. Results: A single specific PCR product of about 1200bp in length from the HL library was generated. Also, we found several conserved motifs, such as CAAT-box, GAGA-box, which are related to regulation of transcription, and the putative binding sites of transcriptional factors such as EBP, EFII, NF-E1 and LV. BLAST showed that the DNA sequences shared high homology with 5′-upstream region of the NR gene from Dunaliella viridis. The isolated 5'-flanking regions were able to strongly drive GUS reporter gene expression , suggesting that it contains the promoter elements necessary for the transcription of the NR gene. The expression pattern of the GUS gene and the NR gene were similar, both ware induced by nitrate and repressed by ammonium. Conclusion: The cloned 5′- flanking sequences of NR gene derived from D. salina might be a specific promoter with the ability to"switch on or off " an expression of the heterologous gene in transgenic D. salina.

Key words: 5′- flanking region function Dunaliella salina nitrate reductase

收稿日期: 2006-06-19 出版日期: 2006-11-25

通讯作者: 薛乐勋

	服务
	把本文推荐给朋友
	加入引用管理器
	E-mail Alert
	RSS
	作者相关文章
	贾岩龙
	潘卫东
	薛乐勋
	闫红霞
	李杰

引用本文:

李杰,贾岩龙,闫红霞,潘卫东,薛乐勋. 杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与功能分析[J]. 中国生物工程杂志, .

. Cloning and characterization of 5′flanking region of nitrate reductase gene derived from Dunaliella Salina. China Biotechnology, .

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I11/1

[1]	陈亚超,李楠楠,刘子迪,胡冰,李春. 源于甘草内生菌的甘草酸合成相关功能基因的宏基因组挖掘^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(9): 37-47.
[2]	王宇轩,陈婷,张永亮. MiR-148生物学功能研究进展^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(7): 74-80.
[3]	郭利成,曹雪玮,傅龙云,王富军,赵健. 一种用于药物蛋白亲和纯化和跨膜转运的双功能标签的开发 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(6): 40-52.
[4]	陈利军,屈晶晶,项春生. 间充质干细胞在2019新型冠状病毒肺炎(COVID-19)中的治疗潜能、临床研究与应用前景^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(11): 43-55.
[5]	姬凯茜,焦丹,谢忠奎,杨果,段子渊. 棕色脂肪细胞特异基因PRDM16的研究进展与展望 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(4): 84-93.
[6]	黄宇,黄书婷,张夕梅,刘堰. 稀有鮈鲫HSP70基因启动子的克隆及功能分析[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(10): 9-16.
[7]	陈军,郑华军,刘亚铭,赵国屏,秦松. 雨生红球藻低覆盖度基因组草图分析 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(7): 21-28.
[8]	徐嘉威,贺花,张静,雷初朝,陈宏,黄永震. *转录因子KLF8基因结构及其功能研究进展*[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(4): 90-95.
[9]	王艳红,刘艳双,石德喜,朱保国,吕保磊,付诗雨,徐苗,王伟,殷奎德. 新型YdjM超家族成员的钠/氢逆向转运蛋白功能鉴定 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(12): 32-40.
[10]	王明轩, 陈海琴, 顾震南, 陈卫, 陈永泉. 高山被孢霉中Δ9脂肪酸脱饱和酶的表达、纯化和其细胞色素b₅功能域的鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(3): 43-50.
[11]	明金玉, 李化丹, 梁士博, 何莉, 于青含, 李集临, 张延明. 植物功能性靶向基因标记的研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(3): 83-91.
[12]	堵晶晶, 谭镇东, 刘辰东, 巫小倩, 张培文, 张顺华, 朱砺. 长链非编码RNA的研究现状[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(9): 59-74.
[13]	扈丽丽, 卓侃, 林柏荣, 廖金铃. 植物寄生线虫效应蛋白功能分析方法的研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(2): 101-108.
[14]	王丽燕, 王煜, 吴坚平, 徐刚, 杨立荣. 腈水合酶NHaseK在大肠杆菌中的功能表达[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(12): 42-48.
[15]	王鸿超, 张陈, 陈殿宁, 乔菊园, 陈海琴, 顾震南, 张灏, 陈卫, 陈永泉. 高山被孢霉亚甲基四氢叶酸脱氢酶的克隆、表达和功能鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(11): 23-29.

Viewed

Full text

Abstract

Cited

Shared

Discussed