猪戊型肝炎病毒基因ORF2片段AG02的融合表达及间接ELISA方法的初步建立

中国生物工程杂志

研究报告

猪戊型肝炎病毒基因ORF2片段AG02的融合表达及间接ELISA方法的初步建立

张可心赵敏郭巍于敏赵宇军相文华

东北林业大学生命科学学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

Cloning and expression of a fragment of swine HEV ORF2 AG02 in E.coli and the Development of Indirect ELISA with

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摘要： 采用巢式RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒（SHEV）结构蛋白基因ORF2部分片段AG02。将该片段插入pET32a表达载体，命名为PET-HEV，将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE-3），经1mM IPTG诱导得到表达，进行SDS-PAGE分析，证明该片段得到融合表达，分子量为33KD。Western blot分析表明，重组蛋白可以与HEV阳性血清反应，表明该蛋白具有良好的抗原性。以纯化的重组蛋白建立了初步的间接ELISA方法,经方阵滴定确定最佳包被浓度为2.43μg/mL，血清最佳的稀释比为1:40,与万泰试剂盒相比较，证明我们建立的ELISA方法有较高的特异性和敏感性。

关键词： 原核表达; 克隆; 间接ELISA; 戊型肝炎病毒; ORF2片段

Abstract: Nest RT-PCR was used to amplified swine hepatitis E virus(SHEV) ORF2-AG02 fragment.AG02 was inserted into pET32a vector and the recombinant expression plasmid PET-HEV was constructed. PET-HEV was transferred into BL21(DE3) and induced by 1mM IPTG, the SDS-PAGE result showed that the 33kDa recombinant protein was expressed. The Western blot analysis showed that the recombinant protein has a good antigenicity with positive SHEV serum. An indirected ELISA was established with the purified recombinant protein, after the square matrix titrate determination best density is 2.43μg/mL, the blood serum best dilution ratio is 1:40,Compares with ten reagents boxes, proved we establish the ELISA method has the high specificity and the sensitivity.

Key words: ORF2 Protoplast fusion insect cell ELISA HEV

收稿日期: 2006-03-24 出版日期: 2006-08-25

通讯作者: 张可心

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张可心,赵敏,郭巍,于敏,赵宇军,相文华. 猪戊型肝炎病毒基因ORF2片段AG02的融合表达及间接ELISA方法的初步建立[J]. 中国生物工程杂志, .

. Cloning and expression of a fragment of swine HEV ORF2 AG02 in E.coli and the Development of Indirect ELISA with. China Biotechnology, .

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https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I08/37

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